[发明专利]从脐带血有效增殖和分化自然杀伤细胞的方法

权利要求书

1.增殖NK细胞的方法，所述方法包括如下步骤：

1)通过将CD3阳性T细胞从脐带血源的单核细胞中清除，来制备CD3阴性细胞；和

2)在用细胞因子处理步骤1)的细胞后，培养所述CD3阴性细胞。

2.如权利要求1所述的增殖NK细胞的方法，其中，通过如下工艺进行步骤1)的制备：

通过使用CD3微珠，使CD3阳性细胞具有磁性；和

通过使用MACS柱分离CD3阴性细胞；或者在用荧光标记CD3阴性T细胞后，通过使用细胞分选仪分离CD3阴性细胞。

3.如权利要求1所述的增殖NK细胞的方法，其中，使用选自于由IL-2、IL-15和IL-21组成的组中的至少两种细胞因子一起进行步骤2)的细胞因子的处理。

4.如权利要求1所述的增殖NK细胞的方法，其中，步骤2)的细胞因子的处理是IL-15和IL-21的共处理。

5.分化NK细胞的方法，所述方法包括如下步骤：

1)通过将CD3阳性T细胞从脐带血源的单核细胞中清除，来制备CD3阴性细胞；和

2)在用细胞因子处理步骤1)的细胞后，培养所述CD3阴性细胞。

6.如权利要求5所述的分化NK细胞的方法，其中，通过如下工艺进行步骤1)的制备：

通过使用CD3微珠，使CD3阳性细胞具有磁性；和

通过使用MACS柱分离CD3阴性细胞；或者在用荧光标记CD3阴性T细胞后，通过使用细胞分选仪分离CD3阴性细胞。

7.如权利要求5所述的分化NK细胞的方法，其中，使用选自于由IL-2、IL-15和IL-21组成的组中的至少两种细胞因子一起进行步骤2)的细胞因子的处理。

8.如权利要求5所述的分化NK细胞的方法，其中，步骤2)的细胞因子的处理是IL-15和IL-21的共处理。

9.制备具有提高的细胞毒性的NK细胞的方法，所述方法包括如下步骤：

1)通过将CD3阳性T细胞从脐带血源的单核细胞中清除，来制备CD3阴性细胞；和

2)在用细胞因子处理步骤1)的细胞后，培养所述CD3阴性细胞。

10.如权利要求9所述的制备具有提高的细胞毒性的NK细胞的方法，其中，通过如下工艺进行步骤1)的制备：

通过使用CD3微珠，使CD3阳性细胞具有磁性；和

通过使用MACS柱分离CD3阴性细胞；或者在用荧光标记CD3阴性T细胞后，通过使用细胞分选仪分离CD3阴性细胞。

11.如权利要求9所述的制备具有提高的细胞毒性的NK细胞的方法，其中，使用选自于由IL-2、IL-15和IL-21组成的组中的至少两种细胞因子一起进行步骤2)的细胞因子的处理。

12.如权利要求9所述的制备具有提高的细胞毒性的NK细胞的方法，其中，步骤2)的细胞因子的处理是IL-15和IL-21的共处理。

13.用于癌症的预防性和治疗性组合物，所述组合物包含由权利要求9所述方法制备的、具有提高的细胞毒性的NK细胞。

14.如权利要求13所述的用于癌症的预防性和治疗性组合物，其中，所述癌症选自于由乳腺癌、黑素瘤、胃癌、肝癌、结肠癌和肺癌组成的组。

15.治疗癌症的方法，所述方法包括将药学上有效剂量的权利要求13所述的组合物给予患有癌症的受试者的步骤。

16.如权利要求15所述的治疗癌症的方法，其中，所述癌症选自于由乳腺癌、黑素瘤、胃癌、肝癌、结肠癌和肺癌组成的组。

17.预防癌症的方法，所述方法包括将药学上有效剂量的权利要求13所述的组合物给予受试者的步骤。

18.如权利要求17所述的预防癌症的方法，其中，所述癌症选自于由乳腺癌、黑素瘤、胃癌、肝癌、结肠癌和肺癌组成的组。

19.由权利要求9所述的方法制备的具有提高的细胞毒性的NK细胞在用于癌症的预防性和治疗性组合物的制备中的用途。

20.如权利要求19所述的用途，其中，所述癌症选自于由乳腺癌、黑素瘤、胃癌、肝癌、结肠癌和肺癌组成的组。