[发明专利]沙门氏菌标记疫苗

说明书

本发明涉及具有灭活的phoN基因的沙门氏菌株。尤其是，本发明涉及ΔphoN肠沙门氏菌(Salmonella enterica)减毒活疫苗株的制备方法。而且，本发明涉及用于免疫接种的动物与沙门氏菌属(Salmonella)感染的动物的区分的使用重组沙门氏菌属(Salmonella)蛋白PhoN的血清学测试系统。此外公开了用于DIVA的细菌学测试系统。 

本发明还涉及肠沙门氏菌肠亚种肠炎血清型变种(Salmonella enterica ssp.enterica serovar Enteritidis)株CLAB SE404(DSM 21972)和其用作减毒活ΔphoN沙门氏菌标记疫苗株用于治疗禽类以阻止肠炎沙门氏菌(Salmonella Enteritidis)感染和/或用于制备保护家畜免于额外的病原体的多价重组沙门氏菌属载体疫苗的用途。CLAB SE404通过血清学或/和细菌学手段致使感染的动物和免疫接种的动物的区分(DIVA)。 

非伤寒沙门氏菌感染是动物和人中普遍的疾病。在人中，其是最常见的主要源于禽类和猪产品的食品来源疾病。在欧盟将建立监督系统，其应降低将病原性沙门氏菌属亚种(Salmonella ssp.)引入食品链(规定EC 2160-2003)。疫苗接种可降低病原性沙门氏菌属亚种(Salmonella ssp.)在家畜中的发病率，由此最小化传播率。例如产蛋鸡和猪的抗-沙门氏菌疫苗可商购。疫苗是细菌苗或减毒活沙门氏菌疫苗。在产蛋鸡中，这些疫苗用于减少病原体的卵巢内传播和粪便脱落。 

减毒活沙门氏菌疫苗被发现功效优于细菌苗。减毒活沙门氏菌疫苗对家畜的优选的使用，需求感染的动物和免疫接种的动物的区分(DIVA)的方法，其符合EC 2160-2003的规定。 

大部分获准的减毒活沙门氏菌疫苗从肠沙门氏菌肠亚种的血清型 变种(Salmonella enterica ssp.enterica serovar)的指定的野生型分离物通过化学诱变制备。当前，通过细菌学手段区别减毒活沙门氏菌疫苗和野生型沙门氏菌属亚种(Salmonella ssp.)。这些方法耗时耗力。免疫接种的和感染的动物的血清学区别将高度优选的。当前可用的减毒活沙门氏菌疫苗不能使根据DIVA策略血清学区别。 

DIVA活疫苗在家畜中成功地用于防止病毒感染。 

标记物疫苗可作为阳性或阴性标记物制备。阳性标记物疫苗含额外的抗原，其在免疫接种的动物中，而非感染的动物中诱导特异性抗体。阳性标记物疫苗明显有短处，因为有随后感染的免疫接种的动物不可与仅免疫接种的动物区分开。 

阴性标记物疫苗通过去除在感染的动物中引发特异性抗体的抗原来制备。由此，阴性标记物疫苗在免疫接种的动物中引发体液免疫应答，这不同于感染的动物。理想情况下，此差异可通过血清学手段检测。不同于阳性标记物疫苗，阴性标记物疫苗致使将随后感染的免疫接种的动物的鉴定。 

为选择阴性标记物抗原，必需考虑的几个方面是：抗原必需是免疫原性的，但不涉及保护动物免于病原体的免疫过程。由此，去除或灭活编码标记物抗原的基因必需维持疫苗株的免疫原性。最后，标记物抗原应特异于病原体，以便避免被可在家畜中出现且引发体液免疫应答的其他生物诱导的假阳性血清学结果。 

由于不同于病毒疫苗的减毒活细菌疫苗的高复杂性，开发减毒活细菌标记物疫苗需要更多努力。减毒活细菌标记物疫苗仍在实验阶段。通过缺失高度免疫原性表面抗原的基因从减毒活沙门氏菌疫苗株建立阴性沙门氏菌标记疫苗的第一候选物。这些减毒活沙门氏菌属DIVA疫苗能够通过血清学手段区分感染的和免疫接种的动物。但是，这些原型相比亲本疫苗株欠保护性。 

基因phoN编码非特异性酸磷酸酶，其已被发现在全部沙门氏菌属亚种中广泛保守。基因phoN在PhoPQ调控子(沙门氏菌属中毒力基因的通用的调节子)控制下表达。不知phoN是否对于动物中沙门 氏菌存活必要。 

phoN与PhoPQ调控子的连接可表明phoN在沙门氏菌属占领宿主组织时活化。由此出现问题，是否消除或灭活减毒活沙门氏菌疫苗株中的基因phoN可负面影响其在免疫接种的动物中诱导保护性免疫的潜力。已知减毒活沙门氏菌疫苗株中单个基因的删除可还降低其残留的毒力，其可减少宿主免疫应答的刺激，且结果可消除保护性免疫。