[发明专利]增强重组蛋白表达的方法

说明书

技术领域

本发明涉及增强重组蛋白从RNA病毒载体的表达的方法，通过使用上述方法制备可用于药物等的重组蛋白的方法，表达所述重组蛋白的RNA病毒载体，等等。

背景技术

目前许多重组蛋白和肽被用作药物组合物。人们认为生物药(biopharmaceuticals)的类型和数量会在将来增加，且将占所有药物的较大一部分。已提出许多生物活性蛋白和肽可作为药物组合物的候选。在这样的情况下，通过增加蛋白和肽的表达水平而简化其制备，可极大地提高它们的可利用性和适用性。

对于基因治疗等中使用的基因转移RNA病毒载体也是如此。当使用基因转移RNA病毒载体将基因施用于基因疗法、基因疫苗、单克隆抗体制备物等时，插入基因的表达水平与载体功能直接相联系。因此，载体性能可通过增加表达水平来提高，这导致蛋白的可利用性和适用性的极大提高。

由细菌产生的AB5毒素是由产毒素细菌产生并分泌至细菌细胞之外的蛋白质性外毒素。AB5毒素由一个具有毒性的活性亚基(A亚基)和五个具有细胞结合活性的结合亚基(B亚基)组成。霍乱毒素是AB5毒素。已报道了将非毒性霍乱毒素B亚基(CTB)作为分子佐剂应用于感染和慢性疾病，例如，用于流感病毒疫苗(Isaka M.等，Microbiol.Immunol.52(2)：55-63，2008)，百日咳疫苗(Isaka M.等，Vaccine，21(11-12)：1165-73，2003)，呼吸道合胞(respiratory syncytial)(RS)病毒疫苗(Singh S.R.等，Viral Immunol.20(2)：261-75，2007；Oien N.L.等，Vaccine，Jun.12(8)：731-5，1994)，癌症疫苗(Wakabayashi A.等，J Immunol.180(6)：4000-10，2008)和阿尔茨海默氏病疫苗(Maier M.等，Vaccine，23(44)：5149-59，2005)。然而，并无报道描述通过RNA病毒载体来表达重组蛋白或通过使用RNA病毒载体来增强重组蛋白的表达。

现有技术文献

非专利文献

[非专利文献1]Isaka M.等，Microbiol Immunol.2008；52(2)：55-63

[非专利文献2]Isaka M.等，Vaccine.2003；21(11-12)：1165-73

[非专利文献3]Singh S.R.等，Viral Immunol.2007；20(2)：261-75

[非专利文献4]Oien N.L.等，Vaccine.1994Jun；12(8)：731-5

[非专利文献5]Wakabayashi A.等，J Immunol.2008；180(6)：4000-10

[非专利文献6]Maier M.等，Vaccine.2005；23(44)：5149-59

发明内容

发明所要解决的问题

本发明正是鉴于上述状况而提出的，本发明的一个目的是提供增强可用作药物组合物的重组蛋白和肽从RNA病毒载体表达的方法，以简化重组蛋白和肽的制备，并通过将上述技术应用于RNA病毒来源的基因转移载体，在基因治疗、基因接种、单克隆抗体制备等应用中提供可产生治疗基因高表达的更有效的基因转移载体。

解决问题的手段

本发明人发现当从RNA病毒表达蛋白或肽时，在不少情况下由于待表达的蛋白或肽的性质，所述蛋白或肽表达水平低下，且制备困难。具体而言，本发明人发现当从RNA病毒载体表达短肽、低溶解性蛋白等时表达效率极低。

同时，AB毒素B亚基(AB5B)是超过10KD的蛋白。其三维结构分析表明其形成五聚体McCann J.A.等，Biochemistry.36(30)：9169-78，1997；Pickens J.C.等，Chem Biol.11(9)：1205-1215，2004)。属于AB5B的霍乱毒素B(CTB)已用作佐剂。然而，并不知道当使用CTB时，蛋白表达水平是否改变。在将重组蛋白作为CTB融合蛋白表达的过程中，本发明人发现当重组蛋白作为CTB融合蛋白使用仙台病毒表达时，与当单独表达该重组蛋白时相比，其表达水平显著增加。