[发明专利]切断固醇侧链的酶蛋白质及其应用

权利要求书

1.以下(a)、(b)或(c)中任一项的蛋白质：

(a)蛋白质，其由SEQ ID NO：2所述的氨基酸序列组成；

(b)蛋白质，其由在SEQ ID NO：2所述的氨基酸序列中发生1个或数个氨基酸的缺失、取代和/或添加而得到的氨基酸序列组成、并具有切断固醇侧链的20位和22位的键的活性、且作为上述活性的反应速度参数的最大速度Vmax为50mmol/分钟/mol以上；

(c)蛋白质，其由与SEQ ID NO：2所述的氨基酸序列具有95％以上同源性的氨基酸序列组成、并具有切断固醇侧链的20位和22位的键的活性、且作为上述活性的反应速度参数的最大速度Vmax为50mmol/分钟/mol以上。

2.具有以下理化性质的切断固醇侧链的酶：

(1)作用：作用于下述式(I)表示的固醇，通过切断固醇侧链部分的20位和22位的碳-碳键的活性来切断该键，从而生成下述式(II)表示的化合物；

(2)底物特异性：当使产生该酶的微生物在含100μg/ml的4-胆甾烯-3-酮或胆固醇的水溶液中于28℃反应5小时时，从4-胆甾烯-3-酮到孕酮的转化反应率为10％以上，且从胆固醇到孕烯醇酮的转化率为10％以上；

(3)最适pH：7.5～8.0；

(4)作用最适温度：15～20℃；

(5)热稳定性：于20℃保存140小时后，能保持30％以上的酶活性；

(6)分子量：从氨基酸序列推算的分子量为53～54KDa，且利用SDS电泳测定的分子量为50～56KDa；

在上式(I)中，

母核部分具有由类固醇类所具有的A、B、C、D环构成的结构，

其1位至17位(10位和13位除外)中任意的0个或1个以上位置上具有碳-碳不饱和键，

其1位至19位(10位和13位除外)中任意的0个或1个以上位置的碳上彼此独立地被式：-OX表示的基团或式：＝O表示的氧代基取代，

在上述式-OX中，当X＝H时表示羟基；当X＝COR₁时表示酰氧基，其中R₁为氢原子或碳原子数10以下的烷基、烯基、炔基或芳香族烃基；当X＝R₂时表示O烷基，其中R₂为任选被氧原子取代的碳原子数10以下的烷基、烯基或炔基；当X＝SO₃M时表示硫酸酯类，其中M为氢原子、碱金属或碱土金属；当X为糖类的1位碳时表示O糖基；或X为与该碳相邻碳原子时表示环氧基；

在侧链部分，R为任选具有环状部分的碳原子数10以下的直链烷基、烯基或炔基，或任选具有环状部分的碳原子数10以下的支链烷基、烯基或炔基，

20位、21位和R内的任意0个或1个以上位置的碳上彼此独立地被式：-OY表示的基团或式：＝O表示的氧代基取代，

在上述式-OY中，当Y＝H时表示羟基；当Y＝COR₃时表示酰氧基，其中R₃为氢原子或碳原子数10以下的烷基、烯基、炔基或芳香族烃基；当Y＝R₄时表示O烷基，其中R₄为任选被氧原子取代的碳原子数10以下的烷基、烯基或炔基；当Y＝SO₃M时表示硫酸酯类，其中M为氢原子、碱金属或碱土金属；当Y为糖类的1位碳时表示O糖基；或Y为与该碳相邻的碳原子时表示环氧基；

在上式(II)中，

母核部分的定义与式(I)的母核部分定义相同；

在侧链部分，21位的碳上被0个或1个式：-OY表示的基团或式：＝O表示的氧代基取代，

在上述式-OY中，当Y＝H时表示羟基；当Y＝COR₃时表示酰氧基，其中R₃为氢原子或碳原子数10以下的烷基、烯基、炔基或芳香族烃基；当Y＝R₄时表示O烷基，其中R₄为任选被氧原子取代的碳原子数10以下的烷基、烯基或炔基；当Y＝SO₃M时表示硫酸酯类，其中M为氢原子、碱金属或碱土金属；或Y为糖类的1位碳时表示O糖基。

3.DNA，其编码权利要求1所述的蛋白质。