[发明专利]不含选择性标记的转质体植物

权利要求书

1.一种构建体，其在转录方向上含有至少(i)编码能赋予对选择试剂抗性的选择性标记嵌合基因，和(ii)嵌合色素基因、或编码发光蛋白的嵌合基因、或编码阴性标记的嵌合基因；二者分别插入在感兴趣嵌合基因的5’-末端序列与3’-末端序列之间，这二个序列含有长度适合它们重组的重叠片段，其中当嵌合基因(ii)编码阴性标记时所述感兴趣基因不作为全长基因存在。

2.如权利要求1所述的构建体，其特征在于，所述感兴趣的基因不作为全长基因存在。

3.如权利要求1或2所述的构建体，其特征在于，所述发光蛋白是绿色荧光蛋白或萤光素酶。

4.如权利要求1活2所述的构建体，其特征在于，所述编码阴性标记的嵌合基因是CodA基因。

5.如权利要求1-4中所述的构建体，其特征在于，所述感兴趣的嵌合基因是：bar基因、编码羟苯丙酮酸二加氧酶(HPPD)的基因、编码5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)的基因、或编码苏芸金芽胞杆菌(Bt)杀虫蛋白的基因。

6.一种获得无选择性标记的转质体植物细胞或植株的方法，该方法包括至少以下步骤：

a)用适合转化质体的载体转化至少一个植物细胞，该载体包含至少(i)编码能赋予对选择试剂抗性的选择性标记的嵌合基因，和(ii)嵌合色素基因、或编码发光蛋白的嵌合基因；两者分别插入在感兴趣嵌合基因的5’-末端序列与3’-末端序列之间，其中这二个序列含有长度适合它们重组的重叠片段；

b)在含有该选择试剂的第一培养基中培养含转化质体的细胞；

c)在不含有该选择试剂的第二培养基中培养所述细胞；

d)采用(ii)编码发光蛋白嵌合基因时选择不发光植物细胞或植株、或采用(ii)嵌合色素基因时选择无色植物细胞或植株。

7.一种获得无选择性标记的转质体植物细胞或植株的方法，该方法包括至少以下步骤：

a)用适合转化质体的载体转化至少一个植物细胞，该载体包含至少(i)编码能赋予对选择试剂抗性的选择性标记的嵌合基因，和(ii)编码阴性选择性标记的嵌合基因；两者分别插入在感兴趣嵌合基因的5’-末端序列与3’-末端序列之间，其中这二个序列含有长度适合它们重组的重叠片段；

b)在含有该选择试剂的第一培养基中培养含转化质体的细胞；

c)在不含有该选择试剂和防止表达阴性标记的细胞生长的第二培养基中培养所述细胞；

d)选择在此第二培养基中生长的植物细胞。

8.如权利要求6-7中任一项所述的方法，其特征在于，所述植物和植物细胞是双子叶植物和植物细胞。

9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述植物和植物细胞是豆科植物和植物细胞，优选大豆植物和植物细胞。

10.含有权利要求1-5中任一项所述构建体的转质体植物细胞。

11.如权利要求10所述的植物细胞，是子叶转质体基因植物细胞。

12.如权利要求11所述的植物细胞，是豆科子叶转质体基因植物细胞，更优选大豆植物细胞。

13.一种获得无选择性标记的转质体豆科植物细胞或植株的方法，该方法包括至少以下步骤：

a)用适合转化质体的载体转化至少一个豆科植物细胞，该载体至少包含一个编码能赋予对选择试剂抗性的选择性标记的嵌合基因，该嵌合基因分别插入在感兴趣嵌合基因的5’-末端序列与3’-末端序列之间，其中这二个序列含有长度适合它们重组的重叠片段；

b)在含有该选择试剂的第一培养基中培养含转化质体的豆科植物细胞；

c)在不含有该选择试剂的第二培养基中培养所述豆科植物细胞。

14.如权利要求13所述的方法，其特征在于，所述豆科植物细胞和植物是大豆植物细胞和植物。

15.如权利要求6-9或13-14中任一项所述的方法，其特征在于，所述感兴趣的嵌合基因是：bar基因、编码羟苯丙酮酸二加氧酶(HPPD)的基因、编码5-烯醇丙酮酰莽草酸-3-磷酸合酶(EPSPS)的基因、或编码苏芸金芽胞杆菌(Bt)杀虫蛋白的基因。