[发明专利]在异养型微生物中制备特制油

权利要求书

1.一种原壳小球藻细胞，包含编码脂肪酰基-ACP硫酯酶的第一外源基因，其中所述外源基因可操作连接莱茵衣藻β微管蛋白启动子或C.sorokinana谷氨酸脱氢酶启动子和藻类质体靶向序列，且所述外源基因是为了在原藻属表达而密码子优化的编码序列，且其中脂肪酰基-ACP硫酯酶的表达改变细胞的脂类特性，脂肪酰基-ACP硫酯酶由核苷酸SEQ ID NO:70、71或78编码，藻类质体靶向序列公开于核苷酸序列SEQ ID NO:79-88或113-124中。

2.如权利要求1所述的细胞，还包含第二外源基因，所述第二外源基因编码选自下列的蛋白：蔗糖转化酶、脂肪酰基-CoA/醛还原酶、脂肪酰基-CoA还原酶、脂肪醛还原酶、脂肪醛脱羰基酶、酰基载体蛋白和赋予抗生素抗性的蛋白。

3.如权利要求1所述的细胞，其中所述脂肪酰基-ACP硫酯酶对链长度为C8、C10、C12或者C14的一种或者多种脂肪酰基-ACP底物具有水解活性。

4.如权利要求3所述的细胞，其中所述细胞的脂质特性选自：至少0.3％C8,至少2％C10,至少2％C12,至少4％C14和至少30％C8-C14。

5.如权利要求1所述的细胞，其中所述细胞的脂质特性是至少4％C8-C14。

6.如权利要求2所述的细胞，其中所述第二外源基因编码蔗糖转化酶。

7.如权利要求2或6所述的细胞，其中所述第二外源基因的至少60％密码子包含表1中的最优选的密码子，使得密码子优化的序列在原藻属中比编码第二外源基因的天然序列更有效的翻译。

8.如权利要求7所述的细胞，其中第一外源基因的至少80％密码子和第二外源基因的至少80％密码子包含表1中的最优选密码子。

9.如权利要求1所述的细胞，其中所述启动子的核苷酸序列与所述原藻属物质是内源的。

10.如权利要求9所述的细胞，其中所述启动子的核苷酸序列包含SEQ ID NO:91-102的核苷酸序列。

11.如权利要求1、9或10中任一项所述的细胞，其中所述启动子在胞外环境从含有至少5mM氮变为含有0mM氮时在所述原藻属细胞中上调至少3倍。

12.一种权利要求1-11中任一项所述的细胞产生的甘油三酯油类组合物，具有下列脂质特性：

a.至少4％C8-C14；和

b.一种或者多种下列属性：

i.少于0.4微克/ml的总类胡萝卜素；

ii.少于0.001微克/ml的番茄红素；

iii.少于0.02微克/ml的β-胡萝卜素；

iv.每千克油中少于0.02毫克的叶绿素；

v.每100克油中0.40-0.60毫克的γ-生育酚；

vi.每100克油中3至9mg的菜油甾醇；以及

vii.每克油中少于0.5毫克的总生育三烯酚。

13.一种混合油类，其包含权利要求12所述的油类组合物，并混合选自下列的油类：大豆油、油菜籽油、加拿大油菜油、棕榈叶油、棕仁油、椰子油、玉米油、废植物油、乌桕油、橄榄油、向日葵油、棉花籽油、鸡脂肪油、牛脂油、微藻油、大型藻类油、萼距花油、亚麻油、花生油、精选白色动物油脂油、猪油、亚麻芥油、芥菜籽油、腰果油、燕麦油、羽扇豆油、洋麻油、金盏花油、大麻油、咖啡豆油、亚麻籽油、榛子油、大戟属油、南瓜籽油、香菜油、山茶油、芝麻油、红花油、稻米油、油桐树油、可可油、干椰子肉油、罂粟花油、蓖麻籽油、碧根果油、加州希蒙得木油、麻风树油、夏威夷果油、巴西坚果油、鳄梨油、石油、和上述任意一种油类的馏分。