[发明专利]选出蛋白酶抗性多肽的方法

权利要求书

1.从肽或多肽集合中挑选蛋白酶抗性肽或多肽的方法，所述方法包括

提供肽或多肽集合；

将集合与蛋白酶在适合蛋白酶活性的条件下温育；和

回收具有所需生物活性的肽或多肽，

从而挑选到蛋白酶抗性肽或多肽。

2.权利要求1的方法，其中所述集合在展示系统中表达，所述蛋白酶是展示系统的内源蛋白酶。

3.权利要求2的方法，其中所述展示系统是细菌，蛋白酶是细菌中表达的蛋白酶。

4.权利要求1-3中任一项的方法，还包括将所述集合与其他蛋白酶在适合所述其他蛋白酶活性的条件下合并。

5.权利要求4的方法，其中所述条件是(i)大约10μg/ml到大约3mg/ml的所述其他蛋白酶，(ii)大约20℃到大约40℃，和(iii)温育至少大约30分钟。

6.权利要求5的方法，其中所述条件(i)是大约10到大约100μg/ml的所述其他蛋白酶。

7.权利要求5或6的方法，其中所述条件(ii)是大约30到大约37℃。

8.权利要求5-7中任一项的方法，其中所述条件(iii)是至少大约1小时。

9.权利要求4-8中任一项的方法，其中所述其他蛋白酶选自在血清、痰、粘液(例如胃粘液、鼻粘液、支气管粘液)、支气管肺泡灌洗液、肺匀浆、肺提取物、胰提取物、胃液、唾液或眼泪中找到的蛋白酶。

10.前述权利要求中任一项的方法，其中所述蛋白酶或者其他蛋白酶包含下述中的一或多种：丝氨酸蛋白酶、半胱氨酸蛋白酶、天冬氨酸蛋白酶、巯基蛋白酶、基质金属蛋白酶、羧肽酶(例如羧肽酶A、羧肽酶B)、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶、胃蛋白酶、木瓜蛋白酶、弹性蛋白酶、leucozyme、胰酶、凝血酶、纤溶酶、组织蛋白酶(例如组织蛋白酶G)、蛋白水解酶(例如蛋白水解酶1、蛋白水解酶2、蛋白水解酶3)、嗜热菌蛋白酶、凝乳酶、肠肽酶、半胱天冬氨酸酶(例如半胱天冬氨酸酶1、半胱天冬氨酸酶2、半胱天冬氨酸酶4、半胱天冬氨酸酶5、半胱天冬氨酸酶9、半胱天冬氨酸酶12、半胱天冬氨酸酶13)、需钙蛋白酶、无花果蛋白酶、梭菌蛋白酶、奇异果蛋白酶、菠萝蛋白酶、分离酶和二肽基肽酶IV(DPP-IV)。

11.前述权利要求中任一项的方法，其中所述蛋白酶或其他蛋白酶是胰蛋白酶或胰凝乳蛋白酶。

12.前述权利要求中任一项的方法，其中所述蛋白酶由生物提取物、生物匀浆或生物制品提供。

13.权利要求12的方法，其中所述生物提取物、生物匀浆或生物制品选自血清、痰、粘液(例如胃粘液、鼻粘液、支气管粘液)、支气管肺泡灌洗液、肺匀浆、肺提取物、胰提取物、胃液、唾液或眼泪。

14.前述权利要求中任一项的方法，其中所需生物活性是结合活性。

15.权利要求14的方法，其中所述结合活性是结合通用配体。

16.权利要求15的方法，其中所述通用配体是蛋白A，蛋白G或蛋白L。

17.权利要求14的方法，其中所述结合活性是与靶配体特异性结合。

18.权利要求17的方法，其中所述靶配体是GLP-1受体。

19.前述权利要求中任一项的方法，其中所述具有所需生物活性的肽或多肽是通过淘选回收的。

20.前述权利要求中任一项的方法，其中所述集合包含展示系统。

21.权利要求20的方法，其中所述展示系统选自噬菌体展示、核糖体展示、乳液区室化和展示、酵母展示、嘌呤霉素展示、细菌展示、在质粒上展示、或者共价展示。

22.权利要求20或21的方法，其中所述展示系统将核酸的编码功能与该核酸编码的肽或多肽的功能性特征联系起来。

23.权利要求20、21或22的方法，其中所述展示系统包含可复制的遗传包。

24.权利要求20-23任一项的方法，其中所述展示系统包含噬菌体展示。

25.权利要求24的方法，其中所述噬菌体展示系统是多价的。