[发明专利]使用环糊精改进核酸扩增反应的特异性、灵敏度和产率

权利要求书

1.一种用于改进对样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其特征在于所述扩增反应在包含至少一种环糊精的反应混合物中进行。

2.根据权利要求1的用于改进对样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其包括下述步骤：

a)将含有所述靶核酸或疑似含有所述靶核酸的样品与含有至少一种环糊精的扩增反应混合物接触；

b)对步骤a)中获得的反应混合物进行扩增反应。

3.根据权利要求1的用于改进对样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其包括下述步骤：

a)将环糊精与至少一种选自热稳定性DNA聚合酶、反应缓冲液、dNTP和引物的组分接触；

b)将含有所述靶核酸或疑似含有所述靶核酸的样品与含有至少一种来自步骤a)的组分的扩增反应混合物接触；

c)对步骤b)中获得的反应混合物进行扩增反应。

4.根据权利要求1的用于改进对样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其包括下述步骤：

a)将所述样品与环糊精接触以获得样品和环糊精的混合物；

b)将所述样品和环糊精的混合物与扩增反应混合物接触；

c)对步骤b)中获得的反应混合物进行扩增反应。

5.根据权利要求1的用于改进对样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其包括下述步骤：

a)将所述样品与扩增反应混合物接触；

b)加入至少一种环糊精；

c)对步骤b)中获得的反应混合物进行扩增反应。

6.根据权利要求1-5中任一项的用于改进对样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其中包含在所述反应混合物中的环糊精的浓度为0.1-50mM。

7.根据权利要求1-6中任一项的用于改进样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其中所述反应混合物包含0.01-0.2单位/μl的热稳定性DNA聚合酶。

8.根据权利要求1-7中任一项的用于改进对样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其中所述反应混合物至少包含样品、环糊精、热稳定性DNA聚合酶、反应缓冲液、dNTP和至少一种引物。

9.根据权利要求1-8中任一项的用于改进对样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其中所述环糊精选自下组：α-环糊精、β-环糊精、γ-环糊精和它们的衍生物。

10.根据权利要求1-9中任一项的用于改进对样品中靶核酸的扩增反应的产率、灵敏度和/或特异性的方法，其中所述环糊精选自下组：单丙二胺-β-环糊精(monopropanediamino-β-cyclodextrin)、6-O-α-D-麦芽糖基-β环糊精、羟乙基-β-环糊精、羟丙基-β-环糊精和2-羟丙基-β-环糊精。

11.一种用于改进由DNA聚合酶催化的核酸体外合成的特异性和/或产率的方法，包括将单链核酸与DNA合成反应混合物接触，所述DNA合成反应混合物包含DNA聚合酶、引物、dNTP和至少一种环糊精。

12.根据权利要求11的用于改进由DNA聚合酶催化的核酸体外合成的特异性和/或产率的方法，包括使所述引物退火至所述单链核酸并在所述引物的3’端掺入互补的dNTP。

13.根据权利要求9-12中任一项的用于改进由DNA聚合酶催化的核酸体外合成的特异性和/或产率的方法，其中包含在最终反应混合物中环糊精的浓度为0.1-50mM，所述最终反应混合物包含单链核酸和所述DNA合成反应混合物。

14.一种用于扩增样品中靶核酸的试剂盒，其在同一容器中包含至少一种环糊精和至少一种选自下组的组分：热稳定性DNA聚合酶、用于核酸扩增的反应缓冲液、dNTP和寡核苷酸引物。

15.根据权利要求14的用于扩增样品中靶核酸的试剂盒，其在同一容器中或另外的容器中还包含逆转录酶。

16.一种用于扩增样品中靶核酸的组合物，其包含环糊精、热稳定性DNA聚合酶和储存缓冲液。