[发明专利]产生EPO方法的过程中控制

权利要求书

1.用于确定红细胞生成素的同种型组成的方法，包括下列步骤：

a)在具有2.5到3.5的下限和5到8的上限的pH范围在凝胶中对包含红细胞生成素的样品进行等电聚焦，其中包括红细胞生成素的样品来源于产生红细胞生成素的真核细胞的培养上清液；

b)将凝胶中包括并分离的蛋白质转移到膜；

c)通过特异性抗体验证与膜结合的红细胞生成素。

2.权利要求1的方法，其特征在于针对红细胞生成素的第一抗体在步骤c)中与结合到膜的红细胞生成素结合，其中当所述第一抗体与结合到膜的红细胞生成素结合时检测这些第一抗体与结合到膜的红细胞生成素的结合。

3.权利要求2的方法，其特征在于通过针对所述第一抗体的第二抗体来检测第一抗体与结合到膜的红细胞生成素的结合。

4.权利要求1的方法，其特征在于在步骤c)中，针对红细胞生成素的第一抗体与结合到膜的红细胞生成素结合，而针对第一抗体的第二抗体与结合红细胞生成素的第一抗体结合。

5.权利要求3或4的方法，其特征在于酶、优选碱性磷酸酶与第二抗体共价结合，其通过底物的催化反应引起颜色反应。

6.权利要求1到5中任一项的方法，其特征在于在膜与针对红细胞生成素的第一抗体温育后，进行一或多个清洗步骤，随后将膜与针对红细胞生成素的第一抗体进一步温育。

7.权利要求1到6中任一项的方法，其特征在于在膜与针对红细胞生成素的第一抗体温育后进行的清洗步骤期间，使用的至少一种溶液包含于水性介质中的有机酸。

8.权利要求7的方法，其特征在于所述溶液包含按重量计0.1到1.5％，优选按重量计0.5到1％，更优选按重量计0.6到0.8％的有机酸。

9.权利要求7或8的方法，其特征在于所述有机酸是单、二或三羧酸，优选选自乙酸、丙酸、乳酸、琥珀酸、抗坏血酸、己二酸或柠檬酸，特别优选乙酸。

10.权利要求1到9中任一项的方法，其特征在于使用聚(偏二氟乙烯)膜作为膜。

11.权利要求1到10中任一项的方法，其特征在于使用聚丙烯酰胺凝胶用于等电聚焦法，所述聚丙烯酰胺凝胶被施加于惰性载体箔。

12.权利要求1到11中任一项的方法，其特征在于为了调节凝胶的pH值，在等电聚焦期间使用两性电解质调节凝胶中的pH范围为pH 3到pH 6。

13.权利要求1到12中任一项的方法，其特征在于包含红细胞生成素的样品来源于在灌注反应器中生长的产生红细胞生成素的真核细胞的培养上清液。

14.权利要求13的方法，其特征在于在等电聚焦法之前给包含红细胞生成素的样品脱盐，如果需要的话进行浓缩。

15.权利要求1到14任一项的方法，其特征在于在发酵期间测定红细胞生成素的同种型组成。

16.用于培养上清液、特别是来自灌注反应器的培养上清液的过程中控制的方法，所述培养上清液来源于产生红细胞生成素的真核细胞的发酵，所述方法包括下列步骤：

a)根据权利要求1到15中任一项的方法测定红细胞生成素的同种型组成；

b)测定样品中红细胞生成素的含量，优选通过ELISA进行；

c)借助于步骤a)和b)中获得的数值和信息选择发酵溶液用于纯化红细胞生成素，或继续发酵。