[发明专利]用于免疫治疗的隐蔽HLA-A24表位的鉴定、优化和用途

说明书

本发明涉及一种方法，所述方法用于鉴定抗原中HLA‑A^*2402限制性隐蔽表位并提高其免疫原性，以获得能够触发针对HLA‑A^*2402限制性隐蔽表位的免疫反应的HLA‑A^*2402限制性表位。本发明还提供由隐蔽或优化的HLA‑A^*2402限制性表位构成的分离的肽。

本发明涉及肽免疫治疗领域。特别地，本发明提供用于有效治疗具有HLA-A^*2402表型的患者的新方法和材料。

肽接种或免疫治疗是当前癌症治疗背景下作为大量研究主题的治疗方法。其原理基于用复制细胞毒性T淋巴细胞(CTL)识别的肿瘤抗原T细胞表位的肽进行免疫，所述CTL在肿瘤细胞的清除中起主要作用。

应该想到的是，CTL不识别全蛋白抗原，而是识别其由表达于细胞表面的I类主要组织相容复合物(MHC I)分子提呈的、通常包含8-10个氨基酸的肽片段。所述肽的提呈是抗原加工的结果，所述抗原加工包括如下三个步骤：

-称作蛋白酶体的多酶复合物对所述抗原的细胞质降解，

-TAP转运蛋白对衍生自所述降解的肽在内质网(ER)中的转位，

-所述肽与所述MHC I分子的结合，及所述肽/MHC I复合物向细胞表面的输出。

肽/MHC I复合物与CTL上的特异T细胞受体(TCR)相互作用，从而诱导所述CTL的刺激和扩增，所述CTL变得能够攻击表达衍生所述肽的抗原的靶细胞。

在抗原加工中，发生肽选择，这产生肽提呈的层级。由MHC I分子优选提呈的肽称作免疫显性的，而弱提呈的肽称作隐蔽的。免疫显性肽表现对MHC I的高亲和性且是免疫原性的，而隐蔽肽表现对MHC I的低亲和性且是非免疫原性的。

在结果令人失望的临床前和临床研究中，肿瘤疫苗已广泛靶向免疫显性肽(Grosset al.，2004；Rosenberg et al.，2004)。

肿瘤抗原常常是由肿瘤过表达且由正常细胞和组织较低水平表达的自身蛋白。由于自身耐受过程，免疫系统不能针对所述自身抗原反应。自身耐受主要涉及免疫显性肽(Cibotti et al.，1992；Gross et al.，2004)，从而解释了所述肽在诱导肿瘤免疫性上的无能。

隐蔽肽少得多地在自身耐受过程中涉及(Cibotti et al.，1992；Gross et al.，2004；Moudgil et al.，1999)并因而能够诱导有效的肿瘤免疫性，前提是其免疫原性得到增强(Engelhorn et al.，2006；Gross et al.，2004)。

增强隐蔽肽免疫原性的常用策略由经氨基酸取代而提高其对MHC I分子的亲和性构成，所述隐蔽肽由于其低MHC I亲和性而是非免疫原性的。对MHC I分子的肽亲和性主要依赖称作“主要锚定残基”的残基在良好定义的位置(主要锚定位置)的存在。所述残基具有MHC I等位基因特异性。主要锚定残基的存在尽管通常不是必需的，但是足以确保高MHC I亲和性。已表明，位于主要锚定位置之外的残基(次级锚定残基)可对肽对MHC I的亲和性施加有利或不利影响。所述次级锚定残基的存在使得能够解释在具有主要锚定基序的肽内结合亲和性存在大的变化(Ruppert et al.，1993)。

旨在增强对MHC I分子亲和性的氨基酸取代应当保留所述优化肽的抗原性。事实上，由优化肽产生的CTL必须与相应的天然肽交叉反应。