[发明专利]用于治疗瘘的自体和异体脂肪来源的基质干细胞组合物

说明书

技术领域

本发明涉及生产用于治疗瘘的临床有效量的人脂肪组织来源的基质干细胞的方法，以及由该方法制备的组合物，其中，基质干细胞可获自自体和异体脂肪组织。

背景技术

再生医学是指治疗损伤组织或功能恶化的组织和/或器官的方法，通常涉及利用多能干细胞的细胞疗法。骨髓来源的干细胞，为用于再生医学的成体干细胞主要类型中的一种，可在体外增殖并分化成各种细胞类型，包括例如肌细胞、心肌细胞、骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、神经细胞等。此外，骨髓来源的干细胞具有免疫调节活性，因而可用于异体骨髓移植或用作自身免疫病的免疫抑制剂。

由于脂肪组织也含有大量的干细胞，目前已经开展了大量的脂肪干细胞作为移植物的的应用研究。与其它种类的组织相比，脂肪组织含有相当大量的干细胞(即分离自脂肪组织的干细胞是分离自相同量的骨髓的约1,000倍)，并且脂肪来源的干细胞像骨髓来源的干细胞一样，是多能的，可分化成软骨细胞、骨细胞、脂肪细胞、肌细胞等。此外，脂肪来源的基质干细胞表现出与骨髓来源的干细胞类似的细胞表面标志的表达，并且具有体内和体外的自体或异体免疫反应的免疫调节活性。

瘘是体内不正常产生的通道，并且可在体内的各个位置由不同原因产生。最经常发生的瘘通常存在于肠系统中，包括肛门和直肠。肛门瘘通常由炎症性疾病引起，其中炎症发生在肛门腺，传播到皮肤外部，渗出分泌物，如脓液，是约20％的肛门痔疮的发病原因。

肛门瘘实质上是指直肠道和肛周皮肤之间的不正常通道，并且诱发粪便通过开放位点而不是肛门的不正常排泄。这主要是由于发生肛门直肠脓肿，其反过来形成分泌脓液的瘘。这种形成的瘘被称为‘肛瘘’。也即，肛瘘是肛门直肠脓肿爆发时，形成于直肠或肛管内部至肛周皮肤的细长孔。肛瘘还可分为下述与在肛门性能中发挥重要作用的外肛门括约肌有关的4类：

(1)内括约肌肛瘘，其具有形成于内肛门括约肌和外肛门括约肌之间的瘘束；

(2)经括约肌肛瘘，其具有穿透外括约肌的瘘束；

(3)括约肌上肛瘘，其具有形成于外括约肌上部的瘘束；和

(4)括约肌外肛瘘，其具有在直肠附近肛门腺窝上部而不是肛门腺窝本身形成的原发性瘘束。

通常已知引起肛瘘的主要原因是肛周腺体的感染，此外，有时肛瘘的发生是由于肺结核、克罗恩氏病、癌症、白血病、白细胞减少症等引起。克罗恩氏病的特征是慢性的和复发性的肠道炎症，并被定为罕见病。由克罗恩氏病引起的瘘可包括，如与阴道相连的直肠-阴道瘘、肠道附近形成的肠道瘘等，以及以上所述的肛瘘。

大部分的瘘可通过外科手术进行治疗。治疗肛周和直肠内的瘘的重要目的在于彻底治疗疾病同时保留肛门括约肌的正常功能。然而，外科手术后瘘通常会复发，并可导致如肛门功能紊乱引起的大便失禁等。因此，目前手术的方法不能提供满意的治疗效果。

瘘手术可包括，如瘘切开术、泄液线、应用推进皮瓣(advanced flap)、肌肉加注法(muscle filling procedure)、应用纤维蛋白胶等。这些中，纤维蛋白胶已在一般的手术中被用作外科手术密封剂，通过混合纤维蛋白原和凝血酶而形成纤维蛋白凝块。对于肛瘘，通过外部开口将纤维蛋白胶注入到瘘束中，从而填满瘘束以及肛瘘的内部开口。

最近几年中，随着与干细胞有关的研究的广泛开展，已经开展了通过移植干细胞到瘘位置治疗肛瘘的方法。例如，Mizuno等人(Plast.Reconstr.Surg.2002，109：199-209)证实了分离自脂肪组织的成体干细胞可分化成肌肉细胞，而Damian等人(Dis Colon Rectum 2005，48：1416-1423)在临床试验的第I阶段，证实了脂肪干细胞可安全地应用于治疗患有克罗恩氏病的患者的肛瘘。此外，据报道，当患有克罗恩氏病的患者进行成体干细胞移植以治疗直肠肛瘘时，即使在移植3个月后也没有发生大便失禁。

已知体外培养脂肪来源的基质干细胞是易于实现的。然而，为获得临床有效量的细胞，通常需要相对较大数量的脂肪组织和较长期的培养阶段。特别是，治疗患有慢性的和/或复发性的疾病，如克罗恩氏病患者的瘘，需要大量的细胞以及改良的细胞培养方法。此外，如果允许使用异体脂肪来源的基质细胞，那它们在临床上是非常有用的。