[发明专利]利用糖蛋白的糖基化的癌症诊断方法

权利要求书

1.一种癌症诊断标记物的筛选方法，所述筛选方法包括下列步骤：

1)从获自癌症患者的样品中分离总蛋白质；

2)通过使用大量蛋白去除柱纯化所述经分离的总蛋白质；

3)通过使用水解酶处理经纯化的蛋白质而制备水解的肽片段混合物；

4)定量分析所述水解的肽片段混合物；

5)筛选与对照组相比显示出量的显著改变的那些肽；以及

6)确认所选的显示出量的显著改变的肽是否源于糖蛋白。

2.根据权利要求1所述的癌症诊断标记物的筛选方法，其特征在于，所述癌症选自肝癌、胃癌、结肠癌、肺癌、子宫癌、乳腺癌、前列腺癌、甲状腺癌和胰腺癌。

3.根据权利要求1所述的癌症诊断标记物的筛选方法，其特征在于，步骤1)中所述样品是选自下述的样品：细胞、血液、血清、血浆、唾液、尿液、脑脊液、卵泡液、乳汁、晶状体液和胰液。

4.根据权利要求1所述的癌症诊断标记物的筛选方法，其特征在于，步骤3)中所述经纯化的蛋白质在水解前使用二硫苏糖醇(DTT)和碘乙酰胺(IAA)进行预处理。

5.根据权利要求1所述的癌症诊断标记物的筛选方法，其特征在于，步骤3)中所述水解酶选自Arg-C、Asp-N、Glu-c、Lys-C、胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶。

6.根据权利要求1所述的癌症诊断标记物的筛选方法，其特征在于，步骤4)中所述质谱法通过液相色谱-质谱(LS-MS)进行。

7.根据权利要求1所述的癌症诊断标记物的筛选方法，其特征在于，步骤6)中所述源于糖蛋白的肽具有距离氨基酸序列N-末端或者C-末端处水解位点8个氨基酸范围内的糖基化位点。

8.根据权利要求1所述的癌症诊断标记物的筛选方法，其特征在于，步骤6)中所述源于糖蛋白的肽选自具有SEQ.ID.NO：1所示氨基酸序列的afamin前体、具有SEQ.ID.NO：2所示氨基酸序列的α1酸性糖蛋白1、具有SEQ.ID.NO：3所示氨基酸序列的激肽原-1前体的高分子量亚型、以及具有SEQ.ID.NO：4所示氨基酸序列的玻连蛋白前体。

9.一种用于提供癌症诊断信息的方法，所述方法包括以下步骤：

1)从获自受试者的样品中分离总蛋白质；

2)通过使用大量蛋白去除柱纯化所述经分离的总蛋白质；

3)通过使用水解酶处理所述经纯化的蛋白质而制备水解的肽片段混合物；

4)定量分析所述水解的肽片段混合物；

5)筛选与对照组相比显示出量的显著改变的那些肽；

6)确认所选的显示出量的显著改变的那些肽是否源于糖蛋白；以及

7)当确认所述显示出量的显著改变的肽源于糖蛋白时，判断或诊断受试者为癌症或癌症高风险。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤1)中所述样品是选自下述的样品：细胞、血液、血清、血浆、唾液、尿液、脑脊液、卵泡液、乳汁、晶状体液和胰液。

11.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤3)中所述水解酶选自Arg-C、Asp-N、Glu-C、Lys-C、胰凝乳蛋白酶和胰蛋白酶。

12.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤7)中所述源于糖蛋白的肽具有距离氨基酸序列N-末端或者C-末端处水解位点8个氨基酸范围内的糖基化位点。

13.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，步骤7)中所述源于糖蛋白的肽选自具有SEQ.ID.NO：1所示氨基酸序列的afamin前体、具有SEQ.ID.NO：2所示氨基酸序列的α1酸性糖蛋白1、具有SEQ.ID.NO：3所示氨基酸序列的激肽原-1前体的高分子量亚型、以及具有SEQ.ID.NO：4所示氨基酸序列的玻连蛋白前体。

14.一种癌症诊断试剂盒，其包含与选自下述的肽特异结合的抗体：具有SEQ.ID.NO：1所示氨基酸序列的afamin前体、具有SEQ.ID.NO：2所示氨基酸序列的α1酸性糖蛋白1、具有SEQ.ID.NO：3所示氨基酸序列的激肽原-1前体的高分子量亚型、以及具有SEQ.ID.NO：4所示氨基酸序列的玻连蛋白前体。