[发明专利]样本分析方法和用于该方法的检测试剂盒有效
申请号: | 200980160163.3 | 申请日: | 2009-06-29 |
公开(公告)号: | CN102459630A | 公开(公告)日: | 2012-05-16 |
发明(设计)人: | 中村奈绪子;桥本幸二;源间信弘 | 申请(专利权)人: | 株式会社东芝 |
主分类号: | C12Q1/68 | 分类号: | C12Q1/68;C12N15/09 |
代理公司: | 北京市中咨律师事务所 11247 | 代理人: | 段承恩;陈海红 |
地址: | 日本*** | 国省代码: | 日本;JP |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 样本 分析 方法 用于 检测 试剂盒 | ||
技术领域
本发明涉及核酸的分析方法。
背景技术
DNA芯片是在各数cm的载玻片和/或硅基板上固定化10~105种DNA核酸链作为探针而得的器件。在使用DNA芯片分析样本时,首先,将所含的核酸用荧光色素、放射性同位素等标记,接着,使其与芯片上的探针反应。如果样本中的核酸含有与芯片上的探针互补的核酸,则发生杂交。被固定于芯片上的探针的序列和固定位置是明确的。因此,通过特定得到来源于标记的信号的芯片上的位置,可以确定样本中所含的核酸序列(非专利文献1)。DNA芯片是对于1个样品一次分析多个基因非常有用的器件(检测器具)。通常对于1个样品使用1个芯片。在观察2个样品的表达量之差时,对于2个样品使用1个芯片。
另一方面,例如,在传染病领域等,有时所研究的基因数为少数,但样本数多。然而,现有技术中需要根据样本数而使用多个芯片,因此包括芯片、劳力、时间的检测成本提高。
非专利文献1:Pease et al.Proc Natl Acac Sci U S A.1994,91,5022-5026
发明内容
发明要解决的课题
鉴于上述情况,本发明的目的是提供降低每1个样本的检测成本、迅速且简便地分析多个样本的方法。
用于解决课题的方法
为了实现上述目标,本发明提供多个样本的分析方法,该分析方法具备下述工序(a)~(e):
工序(a)对每个样本准备包含第1引物和第2引物的引物组,所述第1引物包含具有对每个所述样本不同的序列的标签序列,所述第2引物与所述第1引物成对使用,其中,所述标签序列被设计成在所述第1引物与每个所述样本的模板核酸中的模板序列杂交时环出(loop out)那样;
工序(b)在对每个所述样本独立的反应体系中,使用与每个所述样本对应的所述引物组,扩增每个所述样本的模板核酸,得到导入了所述标签序列的扩增产物;
工序(c)将由每个所述样本得到的所述扩增产物混合在一起;
工序(d)使具有检测包含所述标签序列的目标序列的序列且被固定化于基体上的核酸探针与在工序(c)中被混合的所述扩增产物反应;
工序(e)通过检测在工序(d)中生成的杂交量,从而对于各样本检测所述目标核酸的有无和/或量。
发明的效果
通过本发明的方法,可以用1个芯片检查多个样本,因此可提供降低每1个样本的检查成本、迅速且简便地分析多个样本的方法。
附图说明
图1是显示标签序列导入引物和核酸探针的图。
图2是显示扩增工序的方案图。
图3是显示检测工序的图。
图4是显示扩增工序的方案图。
图5是显示引物的图。
图6是显示LAMP扩增的中间产物的图。
图7是显示扩增工序的方案图。
图8是显示检测工序的图。
图9是显示引物的图。
图10是显示扩增工序的方案图。
图11是DNA芯片的平面图。
图12是DNA芯片的平面图。
图13是显示通过限制性酶处理来切割扩增产物的结果的图。
图14A是显示多个样本的检测结果的图。
图14B是显示多个样本的检测结果的图。
图14C是显示多个样本的检测结果的图。
具体实施方式
[定义]
本说明书中使用的“核酸”的用语概括地表示DNA、RNA、PNA、LNA、S-寡核苷酸、寡脱氧核苷磷酸甲酯等可以将其部分结构用碱基序列表示的物质。
所谓“样本”,是应该进行本发明的分析方法的对象,只要是可能包含核酸的样品即可。样本优选处于不妨碍扩增反应和/或杂交反应的状态。例如,为了使用从生物体等获得的材料作为本发明的样本,可以通过其自身公知的任一方法来进行前处理。例如,样本也可以是液体,这时也可以称作“被检液”。因此,“被检液”可以解释为可能存在核酸或模板核酸的溶液。
“多样本(multiple samples)”和“多个样本(plural samples)”的词语表示2个或2个以上的样本,可以以可交换的方式使用。
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