[发明专利]检测猪瘟病毒野毒的胶体金免疫层析试纸条

权利要求书

1.一种检测猪瘟病毒野毒的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：由吸水纸(1)、硝酸纤维素膜(2)、胶体金垫(3)、样品垫(4)和支持物(5)组成；所述的硝酸纤维素膜(2)含有一条由抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体HQ06包被而成的检测线和由兔抗鼠IgG抗体包被而成的质控线；所述的胶体金垫(3)结合由胶体金标记的抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体6E10；其中，吸水纸(1)、硝酸纤维膜(2)和胶体金垫(3)按照以下次序相连接并附着在支持物(5)上：胶体金垫(3)与靠近硝酸纤维膜(2)上的检测线的一端相连接，吸水纸(1)与靠近硝酸纤维素膜(2)上的质控线的一端相连接；样品垫(4)的一端附着在胶体金垫(3)上，胶体金垫(3)的另一端与硝酸纤维素膜(2)相衔接。

2.按照权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于：所述的支持物(5)是塑料板、硬纸板或铝板。

3.按照权利要求1所述的胶体金免疫层析试纸条，其特征在于，所述的胶体金垫按照以下方法制备得到：

(1)制备胶体金颗粒：取0.01％的氯金酸100mL，搅拌状态加热至90℃，加入1.8mL 1％柠檬酸三纳溶液，柠檬酸三钠与氯金酸溶液充分混匀后，降低搅拌器的转速，继续加热维持整个反应体系温度在95℃；当溶液颜色由浅黄色变成酒红色时，停止加热，冷却至室温；用0.1mol/L的K₂CO₃将胶体金溶液pH值调至8.2，用0.22μm滤膜过滤后装入洁净的玻璃瓶中，4℃避光保存；

(2)制备胶体金标记的抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体6E10溶液：将6E10单抗与胶体金溶液用磁力搅拌器混合；加入5％的BSA溶液至终浓度为1％，离心20min弃沉淀；10,000r/min离心60min，弃上清；沉淀物用0.02mol/L硼酸盐缓冲液稀释至原体积的1/10，4℃保存备用；其中，6E10单抗与胶体金溶液的标记量为18.75μg/mL；

(3)取玻璃纤维纸，将其浸入步骤(2)所制备的胶体金标记的抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体6E10溶液中1h，室温干燥，即得。

4.一种制备权利要求1所述胶体金免疫层析试纸条的方法，包括：

(1)将抗猪瘟病毒E2蛋白的单克隆抗体6E10和兔抗鼠IgG抗体间隔4-6mm喷在硝酸纤维膜(2)上，分别作为检测线和质控线，将包被好的硝酸纤维膜封闭其余蛋白结合位点，洗涤，干燥，备用；

(2)将硝酸纤维膜(2)、胶体金垫(3)、样品垫(4)、吸水纸(1)按照以下次序粘在支持物上：将胶体金垫连接在靠近硝酸纤维膜检测线的一端，边缘附着在硝酸纤维素膜上，样品垫附着在胶体金垫的另一端上；吸水纸连接在硝酸纤维素膜的另一端，与硝酸纤维素膜的质控线相接近；

(3)将粘好的支持板材料切成3mm宽的试纸条，即得。