[发明专利]复合形式的钙调素样皮肤蛋白CLSP的应用

说明书

技术领域

本发明涉及将复合形式的钙调素样皮肤蛋白(calmodulin-like skin protein)(CLSP)、该蛋白的肽片段或其类似物在评价上皮(特别是表皮)的老化状态的标记中的应用。

背景技术

上皮是细胞彼此接合连接且位于基膜上的组织。它们或者形成外部覆盖层(例如在皮肤的表面，或者表皮)，或者在粘膜的表面形成内部覆盖层。它们也可以形成腺。

更具体地，这些上皮是这样一种结构，该结构的动态平衡是通过执行一套细微调节的作用于细胞增殖、迁移和分化以及各种细胞外基质成分合成的所有阶段的细胞内和细胞外信号产生的。这些信号可以特别地由角化细胞产生的因子的作用形成。

特别地，保持上皮的正常生理功能包括上皮细胞末端分化和/或蛋白聚糖合成。

如特别关注的表皮，为上皮，一般分为：由角质形成细胞形成的基底层，所述角质形成细胞特别含有皮肤干细胞并构成表皮的生发层；由位于所述基底层上的多层的多角细胞构成的“棘状”层；含有一至三层的所谓扁平形细胞(含有特殊的细胞质内含物、透明角质颗粒)的“颗粒”层；最后是一组上层细胞，称为角质层(或角化层)，由处于分化末期的角质形成细胞构成，称作角化细胞(corneocytes)。

在有机体和环境之间起屏障作用的皮肤的最外部分的角质层，以及构成头发的头部的毛囊的新生部分的毛干都是角质形成细胞分化的结果。表皮分化是来自基底层分化和迁移的角质形成细胞的成熟过程从而导致角化细胞的形成的结果，角化细胞是完全角质化的死亡细胞。这种分化是理想调整现象的结果，使表皮的厚度保持不变，从而保证表皮的动态稳定。

许多皮肤失调或病态状况可能是因为表皮动态稳定的功能障碍导致的。

因此，对于老化的皮肤，这种功能障碍通常表现为出现皱纹(微小的和深的皱纹)、失去弹性、粗糙感和干燥。从组织学的角度看，观察到了真皮-表皮的平坦交界和真皮厚度和表皮厚度的下降。胶原和糖胺聚糖含量下降。皮肤屏障功能受损。长期受阳光照射会加重所有这些现象。

同样地，在妇女的绝经期这种功能障碍会更加恶化。

发明内容

本发明特别地以角质层中的复合形式的钙调素样皮肤蛋白CLSP为特征，还发现该蛋白的表达在上皮的时序老化(chronological ageing)过程中被差异地调整。

CLSP是结合钙的蛋白，属于钙调蛋白族，其前体形式包括146个氨基酸。其分子量约为16kDa，与钙调蛋白的氨基酸序列同源性约为52％。

CLSP的结构包括4个潜在的“EF-hand”钙结合位点、潜在的N-糖基化位点、多个潜在的磷酰化位点和十四烷基化位点。

CLSP与钙的结合引起了其构象的改变，从而使其活化，特别是使其能够与各种目标蛋白相互作用。

已经证明在光诱导老化的过程中编码CLSP的mRNA增加(Urschitz，J.et al.，J.Invest.Dermatol.，2002，119：3-13)，即，光诱导老化是由于皮肤反复地暴露于阳光下而引起的，这是与时序老化截然不同的过程，时序老化就是与时间流逝相关的生理性老化。

作为其一部分，文献US 2004/0142335观测到：通过转录组序列分析(transcriptome analysis)，与年轻个体相比，老年个体的皮肤中编码CLSP蛋白的mRNA的表达增加。

因此，CLSP可能特别参与了角质形成细胞末端分化过程(B.Mehul et al.，J.Biol.Chem.，2000，Apr.28；275(17)：12841-7)、(EP 1204744)。

最近，本发明的发明人意外地发现老年人表皮的角质层中特殊形式的CLSP表达减少。非常明显地，发明人表征的形式对应于与迄今为止研究过的CLSP形式(特别是与上述的不同)不同的蛋白成熟阶段。

如下面所表现的，发明人使用特殊的ELISA测定技术表征了其复合形式，特别是下文中实施例1所描述的复合形式。

因此，根据本发明的一个方面，本发明涉及至少一种复合形式的钙调素样皮肤蛋白(或CLSP)的在作为特别是在体外或离体情况下表征上皮(特别是表皮)时序老化的状态的工具中的应用，所述复合形式至少部分来自于具有以下氨基酸序列的多肽，所述氨基酸序列全部或者部分由SEQ ID NO 1表示的核酸序列或其类似物或片段编码。

“时序老化”在本发明中的含义是将持续暴露于太阳或U.V.下的一种皮肤现象(即光导致的皮肤老化)排除本发明的范围。