[发明专利]FMU-EPCAM-4E4单克隆抗体的轻链和重链可变区

说明书

技术领域

本发明属于生物医学技术领域，涉及一种单克隆抗体，特别涉及一种抗人EPCAM的FMU-EPCAM-4E4单克隆抗体的轻链和重链可变区，包括其氨基酸序列和核苷酸序列。

背景技术

上皮细胞黏附分子(EPCAM)最初是作为结肠癌的优势表位被发现，当时认为其作用是细胞黏附和治疗用抗体的可靠结合位点。目前研究认为，EPCAM是糖基化的I型跨膜糖蛋白，分子量为30到40kD，其结构包括有一个表皮生长因子样和一个甲状腺球蛋白样的胞膜外区，一段跨膜区和一段26个氨基酸的胞浆区。在正常细胞中EPCAM主要位于上皮细胞间隙的紧密连接处。由EPCAM表达的强度和频率显示，其基本上高表达于所有人类腺癌、部分鳞状细胞癌、视网膜母细胞瘤和肝细胞癌。

2007年以前对EPCAM功能方面的研究发现：EPCAM在细胞增殖、迁移和信号转导中具有重要作用。例如：EPCAM在人和啮鼠动物细胞的增强表达，增强了细胞锚定和血清生长因子非依赖的增殖并且增加了如c-myc和cyclins在内的各种靶基因的表达；在乳腺癌细胞系，EPCAM信号经RNA干涉，可造成细胞增殖、迁移和侵袭能力的降低。

最近的研究证实：EPCAM可以作为一些实体肿瘤干细胞的表面标志物之一，也可以作为正常干细胞表面标志物的组成部分。同时，研究结果还很好地解释了EPCAM在肿瘤细胞高表达的原因，并且发现其与一些肿瘤患者预后较差和生存率较低有关；并进一步解释了EPCAM与肿瘤的关系。此外，小鼠胚胎干细胞实验证实，EPCAM在肿瘤干细胞、正常干细胞上的高表达和其自身正反馈的上调，对确保维持这些正常干细胞及以恶性干细胞的增殖非常重要。

抗EPCAM抗体用于肿瘤治疗的研究一直是抗体治疗研究的热点。早在1979年开发的鼠源性抗EPCAM抗体17-1A，于1982年就用于对肿瘤的临床治疗。但是鼠源性抗体药物在人体使用时，由于其具有免疫原性，会引起人体的免疫反应，从而造成对抗体药物的清除或免疫复合物介导的超敏反应。对鼠源性抗体基因改造可以部分解决其免疫原性问题，如构建嵌合抗体或人源化抗体等。

抗体单体分子是由两条相同的重链(H链)和两条相同的轻链(L链)，通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。H链和L链包括氨基(N)端和羧基(C)端，靠近N端的可变区(V区)由高变区/互补决定区(HVR/CDR)和骨架区(FR)组成；靠近C端为恒定区(C区)。重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)形成的蛋白质折叠是抗原结合部位，其中的CDR/HVR是抗体与抗原决定基互补结合的部位，C区引发抗原抗体识别后的反应。抗体根据FR/C区不同可分为人源、鼠源等，鼠源性抗体在人体内使用时具有免疫原性，易引起人体的免疫反应，这些免疫反应可引起对鼠源性抗体的清除以及免疫复合物介导的超敏反应。为了克服鼠源性抗体的缺陷，需要构建高亲和力的特异性嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体。

在改造过程中，最为重要的是首先必须获得具有良好特异性和亲和力鼠源性亲本抗体，克隆其轻链和重链可变区基因，然后将这两条基因进行改造，构建重组抗体基因。针对这些问题，抗EPCAM治疗性抗体的研发不断取得进展，抗EPCAM的大鼠和小鼠双特异性抗体Catumaxomab，单链抗体Proxinium，人源化抗体ING-1，人源化融合抗体EMD和完全人源化抗体Adecatumumab(MT201)等先后进入临床治疗肿瘤的研究。目前在临床试验中，通过改造的抗体Adecatumumab治疗乳腺癌取得了良好的效果。因此，筛选出高亲和力鼠源性抗人EPCAM单克隆抗体，从中克隆出轻、重链可变区基因，对进一步改善以EPCAM为靶点的药物制备和对肿瘤的治疗具有非常重要的意义。

发明内容

本发明解决的问题在于提供一种抗人EPCAM的FMU-EPCAM-4E4单克隆抗体的轻链和重链可变区，包括其氨基酸和核苷酸序列，为构建高亲和力的抗EPCAM嵌合或人源化基因工程抗体提供支持。

本发明是通过以下技术方案来实现：

FMU-EPCAM-4E4单克隆抗体的轻链和重链可变区，所述轻链可变区的3个互补决定区(CDR)序列分别为：

CDR1：Gln-Ser-Leu-Leu-Asp-Ser-Asp-Gly-Lys-Thr-Tyr；

CDR2：Val-Val-Ser-Lys-Leu-Asp；

CDR3：Trp-Gln-Gly-Thr-His-Phe-Pro-Trp-Thr；

所述重链可变区的3个互补决定区(CDR)序列分别为：