[发明专利]丙型肝炎病毒基因分型及IL28位点多态性检测试剂盒

说明书

技术领域

本发明涉及检测丙型肝炎病毒基因型及IL28位点多态性的试剂盒，特别是涉及使用核酸反向斑点杂交技术制备一种丙型肝炎病毒基因型及IL28位点多态性检测试剂盒，本发明的试剂盒可以快速准确地区分样品中丙型肝炎病毒基因型及IL28位点多态性。

背景技术

丙型肝炎病毒(hepatitis C virus，HCV)是严重危害人类健康的肝炎病毒之，是重要的肝脏疾病致病因子。目前，全球有超过1.7亿人感染HCV，其中每年超过10万例丙型肝炎患者发展为肝癌，进而出现消化道出血及腹水。根据WHO 2002年年报报道，在2001年，慢性肝病共引起1,400万例死亡，其中79.6万例由肝硬化引起、61.6万例由原发性肝癌引起。而在2001年，因慢性肝病引起死亡的病例中就有20％(超过2.8万)是由HCV感染引起。目前已经有大量病例可以证明在大多数国家由肝癌引起的死亡数量的增加是由于丙型肝炎感染造成。

HCV不同基因型感染者的重症化程度和几率存在明显差异，因此HCV分型检测具有重要的临床意义。研究报道在慢性HCV感染者中，与其他基因型相比，HCV 1b型感染与更严重的肝脏疾病、更迅速的疾病恶化相关(Nousbaum JB，et al.Ann Intern Med，1995，122：161-168)。Zein等(Zein NN，et al.Ann Intern Med，1996，125：634-639)发现HCV 1b基因型在肝硬化和肝脏失代偿要求肝移植的慢性活动性丙型肝炎患者中的感染率远远高于其他基因型。有证据表明，在HCV 1b感染率较高的日本，肝细胞肝癌的发生率远远高于HCV 1b感染率低的欧洲或美国，且发生时间也更早。另外，Zein等(Zein NN，et al.Ann Intern Med，1996，125：634-639)发现，在美国，感染HCV 1b基因型的患者年龄普遍高于感染其他型别的患者，HCV 1b基因型的患者感染时间更早且病程更长；相同研究结果在法国和西班牙也有报道(PolS，et al.Gastroenterology，1995，108：581-583；Davis GL，et al.Hepatology，1997，26：122S-127S)。因此，HCV 1b基因型是更严重的HCV相关性肝脏疾病的标志物。

HCV基因分型另一个重要的临床意义在于有助于预测治疗效果。丙型肝炎病毒分为急性和慢性，急性丙型肝炎虽然有部分患者可以自愈，但对所有的急性丙型肝炎患者应给予积极治疗且疗效好，其中最主要的治疗当属抗病毒治疗；慢性丙型肝炎的治疗，目前国内外公认有效的也只有干扰素。大量临床试验表明，HCV 1b及1a基因型比HCV 2型或3型对干扰素治疗的持续病毒学应答(SVR)更差(Pawlotsky JM，et al.Science，2001；292：2323-2325)。HCV2型感染患者有60-70％在干扰素治疗6个月后有应答，而HCV 1型感染者只有10-15％有应答反应。这种差别在干扰素治疗的持续性应答方面经常出现，并且不受肝脏组织学特点或治疗前HCV RNA水平的影响。相同的治疗方法对不同基因型HCV感染的治疗效果确实存在差异，检测HCV基因型将有助于HCV感染的临床诊断并预测治疗效果，为调整用药剂量及治疗时间，制定个体化抗病毒治疗方案提供指导。

此外慢性丙型肝炎患者在治疗过程中呈现很大的差异，即：个体对药物的应答程度不同。一项最新的研究表明(DL Thomas，et al.Nature.2009，461(7265)：798-801)：人体DNA(脱氧核糖核酸)分子中有一个与防感染基因IL28B相连的基因，当这一基因的碱基T被碱基C替换时，人们接受丙肝疗法的效果便会发生显著变化。研究者研究了1600多名丙肝患者后发现，碱基T被碱基C替换后，丙肝患者比没有变化的患者的治疗效果要好得多。IL28B基因该位点具有C碱基的丙肝患者80％都被治愈，而T基因的丙肝患者只有30％被治愈。这一研究结果解释了为什么有些丙肝患者的治疗效果很好，有些人却治疗无效。此前科学家一直不知道造成疗效差异的原因，将来丙肝患者可根据他们的基因来选择适当的治疗方法。