[发明专利]抑制小鼠TRAF6基因表达的shRNA及其应用

权利要求书

1.一种抑制小鼠TRAF6基因表达的shRNA，其特征在于：所述shRNA的脱氧核糖核酸序列如下所示：GAATCACTTGGCACGACACTT。

2.权利要求1所述抑制小鼠TRAF6基因表达的shRNA的应用，其特征在于：所述shRNA应用于抑制小鼠TRAF6基因的表达。

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于：先将所述shRNA构建于慢病毒载体上，再将由所述shRNA和慢病毒载体组成的重组质粒应用于抑制小鼠TRAF6基因表达。

4.根据权利要求3所述的应用，其特征在于：所述的慢病毒载体为CS-RfA-EG慢病毒载体。

5.根据权利要求4所述的应用，其特征在于：将所述的shRNA构建于CS-RfA-EG慢病毒载体上，包括以下步骤：

(1)设计含有抑制小鼠TRAF6基因的shRNA的DNA序列，如下所示：

GAGTCACTTGGTACGATACTT GTCGAAGAGAAGTGTCGTGCCAAGTGATTC；

为了将其克隆至pENTR/U6载体上，合成以下DNA序列：

FP：5’-CACCGAGTCACTTGGTACGATACTT GTCGAAGAGAAGTGTCGTGCCAAGTGATTC-3’

RP：5’-AAAAGAATCACTTGGCACGACACTT CTCTTCGACAAGTATCGTACCAAGTGACTC-3’；

(2)将DNA序列FP和RP退火，然后置于冰上放置至少5min；接着将退火后的FP和RP按等摩尔量进行混合，孵育，沉淀，得到双链DNA片段；

(3)将pENTR/U6载体与步骤(2)得到的双链DNA片段进行连接，得到重组载体pENTR/U6-TRAF6-shRNA；

(4)通过Gateway技术将位于重组载体pENTR/U6-TRAF6-shRNA上的双链DNA片段转移至慢病毒载体CS-RfA-EG上，得到CS-RfA-EG-TRAF6-shRNA重组质粒。

6.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述退火的条件为于95℃退火5min。

7.根据权利要求5所述的应用，其特征在于：所述孵育的条件为37℃孵育2h。

8.一种重组质粒，含有CS-RfA-EG慢病毒载体和权利要求1所述含有抑制小鼠TRAF6基因的shRNA。

9.根据权利要求8所述的重组质粒，其特征在于：所述的重组质粒由CS-RfA-EG慢病毒载体和如下所示的含有抑制小鼠TRAF6基因的shRNA的DNA序列组成：GAGTCACTTGGTACGATACTT GTCGAAGAGAAG TGTCGTGCCAAGTGATTC；所述的GTCGAAGAG为loop序列。