[发明专利]内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽11B及其应用

说明书

技术领域

本发明属于分子生物学领域和医学领域，特别涉及一种内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽11B及其应用。

背景技术

VEGF是1989年Ferrara在牛垂体滤泡星形细胞体外培养液中首先纯化出来的一种相对分子量在34～42KD的同源二聚体蛋白。人类的VEGF基因结构位于染色体的6p21.3上，由8个外显子和7个内含子交替构成。根据其mRNA的剪切方式不同，产生了5种不同的VEGF异构体，包括VEGF206、VEGF189、VEGF165、VEGF145和VEGF121。这5种VEGF的异构体均具有诱导内皮细胞增生的活性，是一种有效的血管形成和通透性诱导因子，其差异主要在于它们与细胞表面以及细胞外基质中肝素的亲和力的不同。

VEGF与其相应的VEGF受体结合来发挥作用。目前克隆出的VEGF受体主要有Flt-1和KDR/Flk-1两种，二者均具有酪氨酸激酶活性，是一种跨膜的糖蛋白，选择性的表达与内皮细胞表面，通过启动不同的信号通路来发挥生物学作用，即促进内皮细胞增殖、促进血管的形成以及血管通透性的增加。

噬菌体展示技术(Phage Display Technology)是一种将外源肽或者蛋白质与特定的噬菌体衣壳蛋白PIII或者PVIII相融合，展示于噬菌体表面来构建蛋白质或多肽文库，并从中筛选出目的蛋白、多肽或抗体的基因工程高新技术。它的优势在于可以将表现型与基因型直接联系在一起，确保能方便快捷的展示出目的蛋白以及该蛋白的基因序列。基于此，近年来在多肽序列鉴定、多肽模拟物的结构和功能的研究以及在人类病毒、细胞、肿瘤等多种生物靶组织多肽的研究方面，噬菌体展示技术发挥着重要的不可替代的作用。

研究表明，VEGF和其受体在许多肿瘤组织中有高表达，在乳腺癌、肺癌、大肠癌、胃癌、黑色素瘤、淋巴瘤、肉瘤、腺瘤等多种肿瘤组织内、外都可检测到大量的VEGF。原位杂交试验显示VEGF的mRNA主要分布在肿瘤细胞内，且肿瘤细胞也高度表达Flk-1，提示肿瘤局部存在自分泌和旁分泌机制促进血管生长。VEGF的表达程度与肿瘤的组织学类型、原发肿瘤的大小、有无血管或淋巴管转移等多种因素有关：肺腺癌组织中VEGF的表达程度显著高于鳞癌；VEGF高表达者，淋巴结转移和远处转移明显增高；低分化肿瘤患者的VEGF表达高于高分化者；VEGF阳性患者的复发率高、预后差、早期死亡率高。而肿瘤患者的年龄、性别、肿瘤生长部位等与VEGF表达无关。鉴于此，研究者们设想，如果能通过噬菌体展示技术和计算机模拟技术得到一系列VEGF的相关表位序列，制成小分子多肽，为今后抗原肽疫苗的研发提供支持，在人体内产生专门针对VEGF的抗体，将会对人体内恶性肿瘤的治疗发挥巨大作用。

目前多肽类药物中，在抗肿瘤方面，Kathleen等人通过人工化学合成了2个多肽，结果表明该多肽对人宫颈癌细胞的抑制率较高，但该肽段与人源性VEGF并无明显的同源性，而Maruta等人得到的具有抗肿瘤活性的保守基序MXXP也与FGFs没有同源性。这些肽段人工合成费用高，而且若作为疫苗，可能会在人体内诱导产生该肽段特异性的抗体，从而阻止其抗肿瘤效用的发挥。

发明内容

本发明的首要目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供一种内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽11B。

本发明的另一目的在于提供所述内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽11B的应用

本发明的目的通过下述技术方案实现：一种内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽11B，其氨基酸序列为Cys Gly Pro Cys Ser Glu Arg Arg Lys HisLeu Phe Val Gln Asp Pro Gln Thr Cys Lys Cys Ser Cys Lys Asn，即CGPCSERRKHLFVQDPQTCKCSCKN；

所述内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽11B的核苷酸序列如下：

TGCGGTCCGTGCTCCGAACGTCGTAAACACCTGTTCGTTCAGGACCCGCAGACCTGCAAATGCTCCTGCAAAAAC；

所述的内皮细胞生长因子VEGF抗原表位的模拟短肽11B用于制备多肽疫苗、肿瘤血管生长抑制剂或者肿瘤导向药物；

所述的肿瘤优选为黑色素瘤。