[发明专利]全人TNFa单克隆抗体及其制备与应用

说明书

技术领域

本发明涉及生物技术领域，具体涉及TNFa结合蛋白及其应用。

背景技术

自身免疫性疾病是继癌症和心血管疾病的第三大类疾病。类风湿性关节炎(RA)是最常见的自身免疫病之一，我国类风湿关节炎患病率约为0.32-0.36％，在60岁以上人群发病率高达30％～40％。面对每人每年几十万元的进口药物治疗费用，患者往往只能长期忍受痛苦的化学治疗，却又收效甚微。

RA的患病人群多，用药量大，使其治疗性药物的市场巨大，2005年全球市场达到60亿美元。目前临床治疗RA的方案很多，首选用大剂量非甾体抗炎药可控制症状，如无效，则临床首选氨甲蝶呤等免疫抑制药治疗。约四分之一的患者首次发病后经及时治疗可终生不再复发，约二分之一的患者经治疗后症状暂时得以缓解，但仍会反复发作，部分最终发展为关节功能障碍；约四分之一的患者对目前所有的常规治疗均无效。

肿瘤坏死因子-α(TNF-α)是类风湿性关节炎病变过程中起主要作用的细胞因子，实验和临床结果均证实TNF是治疗该病的适合靶点。国外对RA的发病机理进行了充分的研究，发现肿瘤坏死因子(Tumor Necrosis Factor alpha，TNF-α)在该疾病的病理进程中起十分关键的作用，患者或动物模型病变关节腔内的TNF水平异常升高。TNFα和TNFβ是哺乳动物细胞中的一类同源分泌型蛋白质，它们相互之间具有很高的同源性，二者都可以对许多细胞类型造成多方面的影响。这两种蛋白都可以通过与细胞膜上的受体作用而影响细胞的生物学功能。肿瘤坏死因子TNFα能够引起肿瘤组织出血坏死并具有多方面功能。成熟分子由157个氨基酸组成，含有两个二硫键，没有糖基化位点。其前体为233个氨基酸组成的多肽，N-端76个氨基酸组成的多肽不是信号肽，它可以把前体固定在细胞膜上，使成熟的分泌型保留在细胞膜上。前体的成熟mRNA长度为1.7kb。在体内主要由单核巨噬细胞产生。

针对TNF-α的抑制剂成为迄今为止最为成功的RA治疗药物。代表药物如Wyeth/Amgen公司Enbrel(etanercept)，Johnson & Johnson，Schering Plough/Centocor公司Remicade(infliximab)，Cambridge Antibody Technology/Abbott的Humira(adalimumab)。Enbrel为Amgen公司开发的制剂，是TNF-α受体和Fc的融合蛋白，不仅对风湿性关节炎有非常不错的疗效，且对牛皮癣及牛皮癣型关节炎也有明显的治疗作用，同时在促进脊椎炎愈合的研究上，Enbrel也进入了二期临床。2004年销售额是25亿美元，预计2008年可达34亿美元。Remicade是一种人鼠嵌合性的抗TNF-α单克隆抗体，可特异性结合可溶性及膜结合型TNF-α，其适应症包括Crohn’病，风湿性关节炎(RA)，重症强直性脊柱炎(AS)。在2003年和2004年全球销售额分别是22.7亿和28.9亿美元，是生物医药领域的“重磅炸弹”。2002年12月Abbott公司的Humira成为第一个获准用于减轻成人中到重度活动期RA的病征和症状及抑制关节结构损伤进展的全人单克隆抗体。由于是全人抗体，避免了Remicade会产生免疫反应的缺点。Humira与Remicade及Enbrel相比的另一个优势是给药方法的便利上。Humira每月只需注射两次，而Remicade和Enbrel必须每周注射两次。Humira市场占有率正逐年提高，2003年和2004年的销售额分别是2.8亿和8.5亿美元。2006年，全球三大抗TNF-α拮抗剂Humira与Remicade及Enbrel 3个药物已近80亿美元，2008年Enbrel(64.9)、Remicade(53.3)、Humira(45.2)、Cimzia合计为163亿美元。