[发明专利]TRPC蛋白亚型联合检测判断卵巢癌预后的方法

说明书

1.技术领域

本检测方法可应用于卵巢癌病人手术后预后的评判。对于选择手术后的辅助性治疗有提示作用。

2.背景技术

卵巢癌是一种严重威胁女性健康的杀手，因为早期缺乏典型症状，直至出现肿瘤转移出现相关症状才被发现，病死率高。大部分患者需要进行手术治疗，手术标本经常规病理诊断得到组织学类型和分级指标，再结合临床分期指标进行预后的判断，操作上复杂，而且准确性不高。为了更加准确的评判卵巢癌病人的危险度，利于合理使用辅助治疗和随诊周期的确定，需要新的预后评判指标。

TRPC是一类细胞膜表面的离子通道，它的表达量与功能与细胞的活性状态有较强的相关性。与多种肿瘤的发生和发展有关，例如：Sydorenko V发现淋巴结转移的前列腺癌细胞株中TRPC1和TRPC3表达增高并与肿瘤的增殖有关。El Hiani Y等发现乳腺癌细胞株中TRPC1和TRPC6表达增高。Aydar E等研究乳腺癌结果显示，癌组织表达TRPC3和TRPC6高于正常对照组织，转移率低的细胞株只表达TRPC3而高转移率的细胞株表达TRPC3和TRPC6，两者在细胞内结合在一起，TRPC6的激活剂可以抑制肿瘤细胞增殖并杀灭细胞，而抑制TRPC6则只抑制细胞增殖而不能杀灭细胞。Cai R等研究胃癌显示TRPC6表达增高，使用TRPC的抑制剂SKF96365则可以抑制细胞周期于G2/M期并抑制体内成瘤性。同样在食管鳞癌的研究也提示了TRPC6参与细胞周期的G2期跨越。Beck B等发现TRPC1和TRPC4与鳞状上皮的分化有关，这与基底细胞癌的发生有关。Yang SL在卵巢癌细胞株中发现TRPC3表达增高，抑制TRPC3的表达可以抑制细胞增殖，阻止细胞周期的M期通过；并抑制体内成瘤。TRPC在肿瘤局部神经系统的分布还与肿瘤性疼痛有关。目前申请者也发现TRPC1、3、6、7等在不同级别的卵巢癌中表达不同(见附图1-4)。

就目前的肿瘤研究发现，肿瘤细胞与正常细胞相比，往往出现多种基因和蛋白呈系统性的改变。正如TRPC离子通道蛋白各种亚型是相互关联起作用的，因此，单一的TRPC亚型检测不能全面反映肿瘤细胞的状态。因此，本发明是将TRPC各亚型联合检测，并采用数学建模，在模型的基础上，判断卵巢癌患者的预后。

3.发明内容

本发明目的在于用联合检测卵巢癌组织中TRPC各亚型的表达强度，配合数学模型进行卵巢癌病人预后的较准确的评价。

4.附图说明

图1TRPC1在不同恶性程度的肿瘤中表达的实例

图2TRPC3在不同恶性程度的肿瘤中表达的实例

图3TRPC6在不同恶性程度的肿瘤中表达的实例

图4TRPC7在不同恶性程度的肿瘤中表达的实例

图5结果评判的人机对话软件的操作界面

5.具体实施方式

本发明是这样实现的：

1)征得病人或病人家属同意，采集不同地区、不同医院的卵巢癌组织标本和临床病史资料。标本进行免疫组织化学染色，标记TRPC1、3、4、5、6、7六种亚型。显微镜观察表达强度，进行评级。所得评级与临床指标、病理指标以及病人预后进行多重线性回归模型建立数学模型，并制作相关计算软件；

2)在此基础上，手术病人的标本送检病理科化验时，除进行常规的病理检查，再进行TRPC1、3、4、5、6、7六种TRPC亚型的免疫组织化学染色(采用指定的公司抗体、指定的浓度和一定的操作流程)；

3)染色完毕的切片在显微镜高倍镜下随机选择5个肿瘤组织视野进行染色强度的评判，判断结果取平均值；

4)六种TRPC亚型的相关值输入软件(附图5)，得出与预后相关的提示。