[发明专利]人核型簇蛋白及其载体与应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种人簇蛋白在治疗癌症中的应用，尤其涉及一种人核型簇蛋白，以及载有该蛋白或相应基因的载体在癌症治疗和对癌细胞生物学行为研究中的应用。

背景技术

簇蛋白，Clusterin是一种多功能的蛋白质，在不同的病理、生理过程中起到重要的作用。由于选择性剪接的结果，Clusterin有两种主要的亚型：分泌型Clusterin(secreted clusterin，sCLU)和核型Clusterin(nuclearclusterin，nCLU)。sCLU有细胞保护作用，而nCLU却在细胞核中堆积，可导致细胞死亡。

sCLU是Clusterin的主要形式，由TRPM-2单拷贝基因表达，定位于8p21-p12染色体上，序列全长1651个碱基，共编码449个氨基酸组成的异二聚体硫酸化糖蛋白，两个亚单位α和β链分子量均为40KDa；nCLU是将Clusterin进行选择性剪接后而得的产物，无第II外显子(exon)，而由第I外显子和第III外显子相连接而成。与sCLU蛋白相比，nCLU缺少内质网靶引导肽，不分离为α链和β链，而且蛋白序列上也没有经过广泛的糖基化(glycosylation)。Clusterin几乎在人体所有组织中都有分布，在恶性肿瘤中也同样不例外。研究表明Clusterin在前列腺癌、肾癌、膀胱癌等泌尿系统肿瘤、乳腺癌、胰腺癌、淋巴瘤和肺癌等均表现出表达上调，而在食管鳞癌组织中则为表达下调。Clusterin可作为许多恶性肿瘤的预后因子来预测肿瘤患者的预后，在肾细胞癌、肝癌、膀胱癌、前列腺癌中，Clusterin高表达患者的总体生存率低；而在非小细胞肺癌和胰腺癌中，Clusterin表达阳性的患者却有更长的生存期(Cancer EpidemiolBiomarkers Prev.，200716，1845-51)。另有研究发现，在一些肿瘤中随着其恶性程度的增高，存在nCLU表达缺失，sCLU表达反而上升的现象，这表明Clusterin在恶性肿瘤的发生和发展中可能起着重要的作用。Clusterin与恶性肿瘤关系密切，Clusterin可能在肿瘤的发生、发展中发挥着重要的作用(Oncogene.，2004，23，2298-304)。

细胞增殖与细胞周期密切相关。在前列腺癌细胞中，Clusterin高表达可使G₀/G₁期细胞比例增加，并使细胞周期进展缓慢，DNA合成下降，且细胞增殖缓慢(Oncogene.，2002，21，4328-34)；nCLU可以通过cyclinB1/细胞周期依赖型激酶1(cyclin B1/CDK1)途径使细胞阻滞在G2/M期，并使细胞凋亡率增加(Cancer Res.，2004，64，6174-82)；而sCLU的过度表达并不影响细胞的增殖(Cancer Res.，2007，67，10325-33)。也有学者认为，Clusterin可以抑制前列腺正常细胞的增殖(中华实验外科杂志，2001，18，415-417)。

迁移和侵袭是肿瘤细胞的恶性表现之一。过度表达sCLU和nCLU均使正常前列腺上皮细胞活动力降低，而在肿瘤细胞中，只有nCLU过度表达可使活动力下降，进一步研究发现nCLU是通过结合α肌动蛋白来影响其活动力，nCLU是α肌动蛋白的一种“分子伴侣”(Cancer Res.，2007，67，10325-33)。研究证明，MT6-MMP(Membrane-type 6 matrixmetalloproteinase)是金属蛋白酶中膜型家族的一员，对于肿瘤细胞的侵袭起到重要的作用。内源性的sCLU蛋白可以作为MT6-MMP的负性调节因子，对降解细胞基质中有重要的功能(J Biol.Chem.，2003，278，36350-7)。

目前，尚没有任何研究证明外源nCLU具有抑制肿瘤细胞增殖，并可使细胞的运动迁移、侵袭能力明显减弱，从而能对治疗肺癌起到重要作用。

发明内容

本发明的一个目的在于提供一种人核型簇蛋白，在癌症治疗中的应用。

本发明的另一个目的在于提供一种人核型簇蛋白的载体，该载体能将人核型簇蛋白输送到细胞中。

本发明的又一个目的在于提供一种含有人核型簇蛋白表达载体的细胞，用于研究人簇蛋白对癌细胞生物学行为的作用机制。

本发明的再一个目的在于提供一种人核型簇蛋白表达载体，以及含有该载体的细胞在癌症治疗中的应用。

本发明的目的是通过如下技术方案实现的：