[发明专利]由启动子调控两种目的基因表达的重组载体

说明书

技术领域：

本发明涉及生命科学领域，具体涉及一种选择性地在肿瘤细胞内增殖、而在正常细胞内基本不增殖、并在肿瘤细胞高效表达抗癌基因的基因序列，及其构建的方法。以及这类基因序列对肿瘤的杀伤作用。

背景技术：

恶性肿瘤是严重危及生物体生命健康的疾病，目前对恶性肿瘤的常规治疗仍为手术及放、化疗。但常规治疗对大多数肿瘤的疗效仍不十分理想，对于大多数化疗药物而言，其治疗剂量与毒性剂量较为接近，在杀伤肿瘤细胞的同时，对正常细胞也造成损害，对机体具有较大毒性，包括危及生命的骨髓抑制、肝肾功能受损等。特异性因此，研究选择性杀伤肿瘤细胞而不影响正常细胞的方法对肿瘤治疗非常重要。

人体免疫系统在应对肿瘤过程中发挥重要作用。杀伤性T细胞(CTL)对肿瘤的生长起着重要的抑制作用，已有研究在临床中应用CTL细胞抑制肿瘤细胞增殖。很多免疫治疗研究也着眼于活化的T细胞的相应作用。目前研究表明，颗粒酶是CTL细胞杀伤肿瘤细胞的重要手段。

颗粒酶是人体免疫细胞的分泌的细胞因子，在肿瘤免疫过程中发挥重要作用。现已发现颗粒酶A、B、H、G、M、K等多个成员。其中颗粒酶B发挥重要作用。颗粒酶B合成后，以酶原形式储存在细胞中，当杀伤性T细胞识别靶细胞时，颗粒酶B被切除N端大小为20个氨基酸的酸性二肽，成为活性形式。活性型颗粒酶B进入细胞后，可切割procaspase-8(caspase-8原蛋白)，传导凋亡信号；通过水解Bc1-2家族成员Bid，促进线粒体的细胞色素C释放，激活下游凋亡途径，导致细胞凋亡；可直接切割procaspase-3(caspase-3原蛋白)，生成Caspase-3，作用于CAD(caspase activated DNAse)/ICAD(the inhibitor ofcaspase-activated DNAse)，产生有活性的CAD，最终导致DNA片断化(GOPNG I S，BARRYM，LISTON P，et al.Granzyme B-induced apoptosi s requires both direct caspaseactivation and relief of caspase inhibition[J].Immunity，2003，18(3)：355-365.)。颗粒酶B也可直接激活ICAD及CAD，并启动不依赖于caspase的核凋亡(SHAR IF-ASKAR IE，ALAM A，RH EAUME E，et al.Direct cleavage of the human DNA fragmentation factor-45by granzyme B induces caspase-activated DNase release and DNA fragmentation[J].EMBOJ，2001，20(12)：3101-3113.)。