[发明专利]一种分支杆菌外输蛋白新抑制剂

说明书

技术领域

本发明涉及胡椒碱的抑制分支杆菌外输蛋白，可以增强抗药用药物作用的用途。

背景技术

伴随着抗生素的广泛使用，各种类型的耐药菌不断出现，抗感染治疗面临着严峻的挑战。细菌外排作用是细菌产生耐药性的重要途径。目前已经发现了5个外排泵类型，它们是：ATP结合盒超家族(ATP-binding cassette superfamily，ABC)，小多重耐药家族(small multidrug resistance family，SMR)，主要易化子超家族(major facilitator superfamily，MFS)，多药及毒性化合物外排家族(multidrug andtoxic com-pound extrusion family，MATE)和耐药节结化细胞分化家族(resistance/nodulation/cell division family，RND)。从底物特异性上看，外排泵又分为特异性外排泵和多重耐药外排泵。迄今发现的具有细菌多重耐药外排泵抑制活性的化合物可分为4类，包括干扰外排泵组装的外排泵抑制剂、阻断外排泵能量来源的外排泵抑制剂、阻碍底物通过外排泵通道的外排泵抑制剂、机制未知的外排泵抑制剂。目前已经报道了一些机制未知的天然化合物外排泵抑制剂。

结核分支杆菌是引起结核病(TB)的病原体。近年来，由于多耐药(MDR)结核分支杆菌突变株的出现，使得结核病成为当今世界三大传染病之一。结核分支杆菌能够在机体免疫系统功能正常的情况下生存于感染宿主的巨噬细胞内，不但未被消灭，反而受其保护，其关键在于分支杆菌具有独特的细胞壁结构。乙胺丁醇(EMB)、异烟肼(INH)、利福平(RIF)是常见的抗结核药物，本发明亦采用与结核分支杆菌有相同细胞壁结构，但生长快速且无致病性的耻垢分支杆菌作为研究模型，寻找直接作用靶标，为新型抗结核病药物的研究开发奠定基础。

胡椒碱为本发明提供的对结核分支杆菌和耻垢分支杆菌有外输蛋白抑制作用的天然化合物。

发明内容：

利用荧光分光光度计测定胡椒碱对分支杆菌(耻垢分支杆菌Mycobacteriumsmegmatis)内溴化乙锭(ethidium bromide)的含量，说明胡椒碱的活性。实验分为内聚实验和外排实验。

本发明中天然化合物胡椒碱，分子式为C₁₇H₁₉NO₃，分子量为285.34，其化学结构为下列立体异构体中的任意一种：

(2E，4E)-5-(1，3-benzodioxol-5-yl)-1-piperidin-1-ylpenta-2，4-dien-1-one

5-(1，3-benzodioxol-5-yl)-1-piperidin-1-ylpenta-2，4-dien-1-one

(2Z，4E)-5-(1，3-benzodioxol-5-yl)-1-piperidin-1-ylpenta-2，4-dien-1-one

(2Z，4Z)-5-(1，3-benzodioxol-5-yl)-1-piperidin-1-ylpenta-2，4-dien-1-one

说明书附图说明：

图1胡椒碱内聚实验结果

图2胡椒碱外排实验结果

具体实施方式

参照文献(Liliana Rodrigues etc.，Thioridazine and chlorpromazine inhibition ofethidium bromide efflux in Mycobacterium avium and Mycobacterium smegmatis，Journal of Antimicrobial Chemotherapy(2008)61，1076-1082)和(Doris echnerl etc.Plant phenolic compounds as ethidium bromide efflux inhibitors in Mycobacteriumsmegmatis，Journal of Antimicrobial Chemotherapy(2008)62，345-348)方法，进行内聚实验和外排实验，具体操作如下：

(1)MIC的测定：在96孔细胞培养平板上，将待测药品做连续2倍稀释，接种菌液，37℃培养24小时，观察结果，统计MIC(最低抑菌浓度)值，结果见下表：