[发明专利]穿刺巴氏杆菌活体繁殖的方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种细菌活体繁殖的方法，具体地讲是涉及一种穿刺巴氏杆菌活体 大量繁殖的方法。

背景技术

穿刺巴氏杆菌(Pasteuria penetrans)寄生根结线虫(Meloidogyne spp.)， 属于革兰氏阳性菌。其繁殖方式是产生不具有游动性的休眠内生孢子。当根结线虫 的二龄幼虫在土壤中移动遇到孢子，通过接触，土壤中的休眠孢子附着于线虫的体 表上，并随着二龄幼虫侵入寄主植物的根系。当二龄幼虫在寄主植物中建立侵染点 并开始取食之后，休眠孢子萌发，产生侵染管并穿过线虫的体壁，侵入到线虫的假 体腔，侵染后的线虫能继续取食，脱皮，发育成三龄，四龄幼虫直至成虫。侵染后 的雌虫不能产卵或只产生少量的卵，其假体腔被穿刺巴氏杆菌充满，菌丝体大量繁 殖，形状如花椰菜，菌丝体分化后进入产孢阶段，最终每个雌虫体内能产生多达二 百万个内生休眠孢子，这些休眠孢子随着根系和雌虫的分解进入土壤中，完成其生 活史。休眠孢子具有良好的抗逆性，能抗高温、干旱(燥)、高湿及各种化学和物理 因子。穿刺巴氏杆菌因其独特的抗逆性和作用机制，大量研究证明它是一种非常有 效防治根结线虫病的生防因子，具有广阔的开发前景。

然而，目前该菌难以在人工合成培养基上大量繁殖，成为大规模应用其防治线 虫的瓶颈，有学者将目光转移到了该菌活体培养方式的研究。早在1980年，Stirling 和Wachtel就提出了利用活体繁殖技术生产穿刺巴氏杆菌菌剂的技术(Stirling.G. R..and Wachtel.M.F.1980.Mass production of Bacillus penetrans for the biological control of root-knot nematodes.Nematologica 26：308-312)， 随后Brown、Channer、Verdejo等学者相继对活体扩繁体系中孢子附着技术进行了 研究，确立了几种穿刺巴氏杆菌孢子附着的技术体系(Brown.S.M.，Smark.G.C. Jr.1985.Root penetration by Meloidogyne incognitajuveniles infected with Bacillus penetrans.Journal of Nematology 17：123-126；Channer.A.G.，and S.R.Gowen.1988.Preliminary studies on the potential of Pasteuria penetrans to control Meliodogyne species.Proceedings of brighton crop protection conference，pests and diseases.Surrey，England：The British Crop Protection Council；Verdejo.S.，and B.A.Jaffee.1988.Reproduction of Pasteuria penetrans in a tissue-culture system containing Meloidogyne javanica and Agrobacterium rhizogenes-transformed roots.Phytopathology 8： 1284-1286)。此外，2006年Gomathi等人试验比较了四种不同植物活体繁殖穿刺 巴氏杆菌的效率(Gomathi.C.，umar.S.，Subramanian.S.Effect of host plant on mass product ion of Pasteuria penetrans.Indian Journal of Nematology. Nematological Society of India，New Delhi，India：2006.36：2，297-299)。

综述以上研究，国内外对活体扩繁中的接种体系并未展开系统的研究。本发明 拟通过对根结线虫的寄主品种、接种量、接种次数、接种时期进行筛选，优化穿刺 巴氏杆菌活体繁殖体系，期望进一步提高穿刺巴氏杆菌活体繁殖的产量。

发明内容

本发明提供了一种活体大量繁殖穿刺巴氏杆菌繁殖的方法。

本发明所提供的穿刺巴氏杆菌活体繁殖的方法，是将附着穿刺巴氏杆菌的根结 线虫接种于番茄上并进行培养。