[发明专利]血管内皮生长因子受体部分多肽及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及一种血管内皮生长因子受体部分多肽及其应用。

背景技术

迄今发现血管内皮生长因子(VEGF)受体家族包括具有两种信号转导途径的受体：酪氨酸激酶受体和非酪氨酸激酶受体，酪氨酸激酶受体包括Flt-1(fms-liketyrosine kinase)、KDR/Flk-1(kinase insert domain containing/fetal liverkinase)及VEGFR-3，Flt-1又称VEGF受体1(VEGFR-1)，KDR/Flk-1又称VEGF受体2(VEGFR-2)，非酪氨酸激酶受体包括肝素样分子、神经纤毛蛋白-1受体(NRP-1)和神经纤毛蛋白-2受体(NRP-2)，其中KDR是VEGF的高亲和力受体，主要参与血管内皮细胞有丝分裂、增殖、迁移、分化、微管形成等生命活动，是目前研究的热点。KDR在肿瘤血管形成过程中起着关键作用，高表达于肿瘤新生血管内皮细胞及恶性程度高的肿瘤细胞，而正常组织中呈低表达。KDR特异性地表达于血管内皮细胞，其表达水平与血管内皮细胞更新速度呈正相关。生理情况下正常组织血管内皮细胞更新速度缓慢，KDR表达很低，肿瘤组织中的血管内皮细胞处于活跃的增殖状态，增殖速度比正常组织血管内皮细胞快500倍，KDR表达很高。KDR的表达水平可作为评估肿瘤生物学行为和预测肿瘤患者预后的指标。KDR的表达水平可以通过与KDR特异结合的抗体进行检测。

发明内容

本发明的目的是提供一种血管内皮生长因子受体部分多肽。

本发明所提供的血管内皮生长因子受体(KDR)部分多肽，其氨基酸序列为序列表中的序列1。

本发明的血管内皮生长因子受体部分多肽，可用来制备免疫原，该免疫原免疫动物可获得与KDR特异结合的多克隆抗体。

对在动物体内产生免疫反应而言，大多数多肽的分子量都太小，将多肽与载体蛋白如匙孔血蓝蛋白或牛血清白蛋白等交联之后，不仅能增加抗原的大小，也能增强免疫性。

因此，本发明还提供了一种复合蛋白。

本发明所提供的复合蛋白是所述多肽与载体蛋白偶联形成的复合蛋白。

本发明的复合蛋白，其中，所述载体蛋白为匙孔血蓝蛋白或牛血清白蛋白。

在免疫动物时，为了增强免疫原性通常将复合蛋白与免疫佐剂混合。

本发明所提供的免疫原，是所述复合蛋白和免疫佐剂的混合物。

本发明的与血管内皮生长因子特异结合的多克隆抗体，是用免疫原免疫动物，采取免疫后动物的血液，获得的血清；所述免疫原是复合蛋白和免疫佐剂的混合物；所述复合蛋白是多肽与载体蛋白偶联形成的复合蛋白，所述多肽的氨基酸序列为序列表中的序列1。

本发明的与血管内皮生长因子特异结合的多克隆抗体，其中，所述载体蛋白为匙孔血蓝蛋白或牛血清白蛋白。

本发明的免疫原免疫动物获得了较高效价的免疫血清，经ELISA检验效价高于1∶60000，并且免疫印迹法证明该免疫血清与鸡血管内皮生长因子受体结合的特异性较强，免疫血清能在细胞水平上检测鸡血管内皮生长因子受体的表达。

附图说明

图1为免疫印迹法检测免疫血清的特异性。

图2为空白对照组激光共聚焦显微镜下显示结果的图片；

A为相差图片，B为相差与荧光叠加图片，C为荧光图片。

图3为对照血清组激光共聚焦显微镜下显示结果的图片；

A为相差图片，B为相差与荧光叠加图片，C为荧光图片。

图4为免疫血清组激光共聚焦显微镜下显示结果的图片；

A为相差图片，B为相差与荧光叠加图片，C为荧光图片。

具体实施方式

实施例1、与KDR特异结合的多克隆抗体

(一)合成免疫原

人工合成免疫多肽，其氨基酸序列为CAQEASPTLPRVHGLVHD。

人工合成对照多肽，其氨基酸序列为AFGQVIEADAFGIDKTATC。

对人工合成的多肽进行检测。

结果表明，人工合成的免疫多肽为白色冻干粉末，分子量为1931.13，HPLC(220nm，C18，线性梯度)检测纯度为98％。

对照多肽为白色冻干粉末，分子量为1957.19，HPLC(220nm，C18，线性梯度)检测纯度为95％。

(二)与鸡血管内皮生长因子受体特异结合的多克隆抗体

免疫多肽与载体蛋白按照质量比1∶1偶联，形成多肽-载体复合蛋白，载体蛋白可以为匙孔血蓝蛋白(KLH)或牛血清白蛋白(BSA)，本实施例为免疫多肽-KLH复合蛋白。