[发明专利]高产胞壁降解酶和抗菌肽的绿色木霉菌株及其生防试剂

说明书

技术领域

本发明涉及一种真菌，尤其涉及一种高产胞壁降解酶和抗菌肽的绿色木霉绿色木菌株及其生防试剂。

背景技术

进入21世纪，随着经济的发展和人民生活水平的不断提高，人们的健康意识和环保意识大大加强。减少化学农药的使用，采用绿色生物农药防治病虫草害已成为农药发展的必然趋势。我国是一个农业大国，每年农作物病虫草害受害面积大约2亿公顷(次)，每年需要生产和使用农药约25万吨(有效成份)。在所使用的农药中，化学农药占了相当大的比例，生物农药所占的比例相对很小。由于化学农药的残留量较大，对人体存在毒害作用，所以化学农药的使用会受到很大程度的限制，生物农药是一种有效解决化学农药的污染和残留问题的一种环保型无公害农药。目前人们对无污染、无公害绿色食品呼声日益高涨，生物防治已经成为继化学防治后又一重要的防治方法，许多生物杀菌剂已经投入使用并取得了显著效果。研究和采用生物防治技术以逐渐取代农药是农业持续性发展的需要。。

一些研究结果表明，利用一些有益微生物对土壤中的特定病原菌的寄主产生有害物质，通过竞争营养和空间等途径来减少病原菌的数量，从而减轻病害发生。因此，应用生物防治不失为一种控制蔬菜病虫害的行之有效的方法。木霉是最有前途的生防菌之一，具有控制病害和促进作物生长的双重效果。木霉属主要用来防治多种植物病害，如番茄、黄瓜和豇豆的猝倒病、草莓的黑根腐病、大白菜的根瘤病等。

木霉菌属于真菌界、双核菌门、半知菌亚门、丝孢纲、丛梗孢目、从梗孢科，是土壤微生物区系的重要组成部分，其菌丝生长及孢子萌发能够适应较广的温湿度范围和pH范围，且腐生性强、生长和繁殖快，可迅速利用营养和占据空间。目前，已知木霉菌的9个种中，有5种具有生防潜力，分别是哈茨木霉(T.harzianum)、绿色木霉(T.virid)、康氏木霉(T.koningii)、钩木霉(T.hamatum)和长枝木霉(T.longibrachiatum)。当前使用最多的是哈茨木霉和绿色木霉。

木霉是一种广谱性拮抗菌，能够拮抗多种病原真菌，尤其对土传真菌有显著的拮抗效果。除个别为弱病原菌外，大多数对植物病原真菌具有拮抗作用，其特点表现在三个方面。第一、木霉菌对于生长的环境具有广泛的适应性，可利用各种简单或复杂的碳源和氮源，甚至还有转化和降解一些有害或持久存在的污染物的能力，最适生长温度为28～32℃，但个别也可在5℃下或60℃上生长和繁殖。第二，木霉菌产生多样的拮抗作用，主要有四种：即竞争作用、重寄生作用、产生抗生物质和溶菌酶类。第三，木霉菌具有寄生的广谱性，对18个属、29个种都可以寄生。

木霉作为有效的生物农药资源，以其适应性广、生存能力强、对植物病原菌拮抗作用的广谱性，在防病同时还能产生多种酶分解土壤中的植物残体、降解大分子化合物使植物能够吸收利用、能与土壤中其它益菌协调生长、不污染环境等优点而倍受青睐。

目前已发现许多微生物具有生防作用，木霉菌(Trichoderma spp.)就是一类普遍存在并具有重要经济意义的生防益菌，已用来防治多种植物病害。早在60多年前，人们就认识到木霉菌对植物病原菌的拮抗作用。近年来，人们对木霉菌的生物防治机制进行了大量的研究，认为其拮抗作用主要表现在代谢胞外酶、抗菌素类物质、诱导植物抗性、水解酶与植物的防卫反应、保护酶与植物的抗病作用、毒性蛋白和协同拮抗作用等方面。

发明内容

本发明提供了一种高产胞壁降解酶和抗菌肽的绿色木霉菌株。

一种高产胞壁降解酶和抗菌肽的绿色木霉菌株，命名为绿色木霉(Trichoderma viride)TV501，保藏于位于武汉市珞珈山武汉大学的中国典型培养物保藏中心(CCTCC)，保藏日期为2009年12月31日，保藏号为CCTCC NO：M 209321。

该菌株主要生理学特征为：菌落在PDA培养基表面生长较快，第二天形成白色菌丝薄层，当分生孢子成熟后，菌落自中央到边缘，渐渐变为不同程度的绿色菌落，菌落与培养基结合紧密。在显微镜下，分生孢子梗从菌丝的侧枝生出，直立分支小枝常对生，上生分生孢子团。分生孢子球形，浅色或无色，菌丝具有横隔和分枝，分枝弯曲或呈波形。

一种利用上述绿色木霉TV501制得的生防试剂，以总重量1000份计，原料组成为：

绿色木霉TV501发酵液    480～970份

表面活性剂             0.01～30份

水                     余量。

所述木霉发酵液通过如下方法制得：