[发明专利]诱导贝类多倍体的生物方法

说明书

技术领域

本发明公开了一种诱导贝类多倍体的生物方法，该方法是一种在规模化诱导鲍鱼、牡蛎、扇贝等贝类多倍体时使用的诱导方法，属于多倍体诱导技术领域。

背景技术

人工诱导产生的贝类三倍体具有个体大、生长快、育性低、抗逆性强、肉质好等显著的经济性状，可大大提高其商品价值。目前多倍体研究中使用的诱导方法有三种：采用温差、静水压等处理的物理方法；使用细胞松弛素B(CB)、秋水仙素、6-二甲基氨基嘌呤(6-DMAP)等药物处理的化学方法；诱导产生的四倍体与普通的二倍体杂交得到三倍体的生物方法。物理方法设备简单、价格低廉，可有效节约诱导成本，但一直未能解决诱导效果不稳定的难题，无法在大规模生产中应用。化学方法诱导效果较稳定，尤以细胞松弛素B(CB)处理最佳，CB处理对不同时期的细胞都有效且对细胞核和细胞器影响较小，具有作用时间长、诱导率高、畸形率低的优点，是目前多倍体诱导研究中运用最为广泛的方法。但由于每次育苗都需使用价格昂贵的药品，且对人体健康存在潜在的危害，投入到实际生产中的成本会很高。生物方法一般是用四倍体与二倍体杂交来生产100％三倍体，高效、安全、简便，可以规模化生产应用，但目前培育出存活的四倍体还有很大的难度，还未具有实际应用意义。所以，上述多倍体的诱导方法都无法真正满足规模化贝类多倍体育苗生产在诱导效果和成本方面的要求。

发明内容

本发明的目的在于提供一种操作简单、容易掌握、成本低、在规模化多倍体育苗生产中诱导贝类多倍体的生物方法。

为实现上述目的，本发明的解决方案是：

本发明是一种诱导贝类多倍体的生物方法，其具体操作步骤如下：(1)对于第一群体雌鲍和第二群体雄鲍杂交的受精卵，用浓度为0.70mg/L-1.00mg/L的细胞松弛素B(CB)抑制其第二极体的释放而获得杂交三倍体试验群体；(2)杂交三倍体试验群体培育养成后，用倍体分析仪进行一一鉴定，经鉴定为三倍体的雌鲍(即杂交三倍体雌鲍)作为母本并与第二群体雄鲍作为父本进行受精，直接诱导三倍体。

所述的第一群体雌鲍为皱纹盘鲍大连群体雌鲍。

所述的第二群体雄鲍为盘鲍日本群体雄鲍。

本发明是一种将同一物种中两个不同亚种间杂交的受精卵用药物处理并将培育的杂交雌性三倍体群体作为母本，与普通群体的雄性作为父本进行受精，从而直接诱导三倍体的方法。

采用上述方案后，本发明具有以下优点：

(1)由于本发明用诱导获得的杂交三倍体雌鲍作为母本，与诱导获得四倍体雌鲍作为母本相比，诱导难度大为降低，而且三倍体的存活率大大高于四倍体，能更容易地获得足够数量的亲贝用于规模化育苗生产。

(2)由于本发明杂交三倍体的诱导处理与普通三倍体的诱导处理相同，而杂交三倍体雌鲍与盘鲍日本群体雄鲍杂交，无需任何处理可直接生产三倍体。这种与普通二倍体雌雄亲贝诱导三倍体时每次都需要诱导处理相比，可大大降低生产成本，提高效率。

(3)由于本发明使用杂交三倍体雌鲍作为母本与盘鲍日本群体雄鲍作为父本进行受精来诱导三倍体的操作方法与普通育苗生产方法一样，一般的育苗技术工人就能掌握，所以在生产中的可操作性更强。

(4)由于本发明使用杂交三倍体雌鲍作为母本与盘鲍日本群体雄鲍作为父本来直接诱导三倍体，可获得相对较高的三倍体率，而且效果稳定，更适合在规模化育苗生产中运用。

综上所述，本发明与目前使用的贝类多倍体诱导方法相比，操作简单，可节省大量药物，大大降低了生产成本，能够直接且有效地诱导出三倍体，有利于贝类多倍体大规模推广应用。

下面结合具体实施例对本发明作进一步的说明。

具体实施方式

本发明是一种将同一物种中两个不同亚种间杂交的受精卵用药物处理并将培育的杂交三倍体雌鲍作为母本，与普通群体的雄性作为父本进行受精，从而直接诱导三倍体的生物方法。

其具体操作步骤如下：

(1)对于皱纹盘鲍大连群体雌鲍和盘鲍日本群体雄鲍杂交的受精卵，用浓度为所述的杂交三倍体雌鲍，即在水温23-25℃下，收取含有40万-50万个受精卵--皱纹盘鲍大连群体雌鲍的卵子与盘鲍日本群体雄鲍的精子受精后的受精卵于3L塑料容器中，用细胞松弛素B(CB)抑制受精卵第二极体的释放诱导三倍体，水溶液终体积为2L，细胞松弛素B(CB)浓度为0.70mg/L-1.00mg/L，诱导处理10分钟。诱导结束后，用含有0.1％(V/V)二甲亚砜(DMSO)的水溶液洗卵2次，每次约15分钟。

(2)将受精卵进行培育，待鲍苗养成至壳长约4.0-5.0cm时，用倍体分析仪分别一一进行检测，鉴定和筛选出得杂交三倍体鲍继续培养；当从性腺外观可明显鉴别雌雄性别时，再次筛选出杂交三倍体雌鲍，继续培养作为母本，并与盘鲍日本群体雄鲍作为父本进行受精，直接诱导三倍体。