[发明专利]一种同时检测32个单核苷酸多态性位点基因型的方法

权利要求书

1.一种同时检测32个单核苷酸多态性位点的方法，这些基因及32个标签单核苷酸多态性位点是内收蛋白1基因：rs3775067、rs1263359，血小板内皮细胞黏附分子-1基因：rs503550，C-反应蛋白基因：rs1205，内皮固有型一氧化氮合酶基因：rs7830、rs3918188，浆细胞膜糖蛋白1基因：rs12528076、rs858341、rs021966、rs858345、rs9308995，L-选择素基因：rs964555、rs2205848、rs4987318、rs2298900，G蛋白β3亚单位基因：rs5445，血管紧张素I转换酶基因：rs4333、rs4305、rs4353，血管紧张素II 1型受体基因：rs6801836、rs2675511、rs5182，血管紧张素原基因：rs1926722、rs7539020、rs3889728、rs493132、rs478523，亚甲基四氢叶酸还原酶基因：rs1801133、rs9651118、rs6541003和肝脂肪酶基因：rs12462668、rs10426971，其特征在于检测方法包括下述步骤：

(1)设计并合成用于扩增32个单核苷酸多态性位点的序列1至序列96引物，每个单核苷酸多态性设计3个引物，其中2个为PCR扩增引物，用于扩增出含有目的单核苷酸多态性位点的片断；1个为延伸引物，用于单核苷酸多态性位点的测序及与玻璃芯片上的寡核苷酸链杂交；

(2)稀释并混合PCR引物，对目标DNA进行PCR扩增；

(3)对扩增产物进行纯化；

(4)稀释并混合延伸引物，进行延伸反应；

(5)杂交；

(6)对杂交板进行荧光扫描，根据荧光信号判断单核苷酸多态性位点的基因型。

2.根据权利要求1所述的一种同时检测32个单核苷酸多态性位点的方法，其特征在于所述的步骤(2)中将PCR引物稀释并混合使其终浓度为2.5μM，构建PCR引物池，每96人份PCR反应体系为：

                                 

试剂成分             体积(μL)

                                 

引物池(2.5μL)       11.2

脱氧核苷酸(2.5mM)    20

10倍PCR缓冲液II      56.2

氯化镁(25mM)         112.6

金牌扩增酶(5U/μL)   11.2

双蒸水               126    

                         

3.根据权利要求1所述的一种同时检测32个单核苷酸多态性位点的方法，其特征在于所述的步骤(2)中PCR循环条件为：

4.根据权利要求1所述的一种同时检测32个单核苷酸多态性位点的方法，其特征在于所述的步骤(4)中将延伸引物稀释并混合使其终浓度为5μM，构建延伸引物池。每96人份PCR反应体系为：