[发明专利]石榴状磁性纳米粒子聚集体的制备及其在DNA分离纯化中的应用

权利要求书

1.一种石榴状磁性纳米粒子聚集体的制备方法，其特征在于采用有机溶剂 高温反应法在反应器中合成，其步骤如下：

(1)称取0.65g无水三氯化铁和0.4g柠檬酸三钠放入反应器中，加入20mL 乙二醇作为溶剂，在溶剂相中通入氮气10min以驱除氧气，磁力搅拌使固体全 部溶解于溶液中；

(2)称取1.2g无水乙酸钠加入到反应体系中，继续搅拌，将反应器置于油浴 加热至220℃，同时磁力搅拌，反应10h停止加热，继续磁力搅拌冷却至室温；

(3)反应后的溶液加入20mL无水乙醇，超声震荡10min，6000rpm离心10min， 弃上清；

(4)沉淀部分继续加入20mL无水乙醇，超声震荡10min，6000rpm离心10min， 弃上清；

(5)沉淀部分加入20mL去离子水，超声震荡10min，6000rpm离心10min，弃 上清；

(6)沉淀分散于10mL去离子水中，即为石榴状磁性纳米粒子聚集体分散液， 室温保存备用。

2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征是所制得的石榴状磁性纳米粒 子聚集体，其粒径为100～500nm。

3.权利要求1所述的制备方法所制得的石榴状磁性纳米粒子聚集体的应用， 其特征是用于K562细胞DNA的分离纯化，步骤如下：

(1)取1mL培养的K562细胞于1.5mL离心管中，1000rpm离心5min，弃 上清；

(2)沉淀细胞用1mL生理盐水1000rpm离心洗涤，离心洗涤2次；

(3)离心洗涤后的细胞加入1mL细胞裂解液，混匀后加入25μg/μL的蛋白 酶K 15μL、40μg/μL的RNA酶5μL，充分混匀后37℃水浴孵育30min；

所述细胞裂解液组成为：3M NaI、5M尿素、40g/L曲拉通-X-100、10mM 乙二胺四乙酸二钠及25mM Tris-HCl；

(4)加入权利要求1方法制得的石榴状磁性纳米粒子聚集体分散液10μL， 充分混匀，静置5min，加入40μL异丙醇，静置5min；

(5)磁分离，弃上清，加入质量浓度70％乙醇1mL洗涤，磁分离，弃上清；

(6)加入50μL TE缓冲液，37℃水浴孵育5min，混匀后磁分离，取上清， 即为K562细胞DNA洗脱液；

所述TE缓冲液组成为：10mM Tris-HCl、1mM乙二胺四乙酸二钠，pH8.0。

4.权利要求1所述的制备方法所制得的石榴状磁性纳米粒子聚集体的应用， 其特征是用于转基因大豆DNA的分离纯化，步骤如下：

(1)3粒转基因大豆种子洗净，纯水中浸泡吸胀24h，手工去皮，加0.2g石英 砂，冰浴下研磨成糊，转入10mL离心管中；

(2)快速加入65℃预热的提取液至9mL处，上下摇动，65℃水浴30min，其 间每5min颠倒三次，10000rpm离心10min，取上清；

所述提取液组成为：pH8.0、0.1M Tris-HCl，pH8.0、0.02M乙二胺四乙酸二 钠，1.5M NaCl，质量浓度2％聚乙烯吡咯烷酮40，质量浓度2％十六烷基三甲基 溴化铵及质量浓度3％β-巯基乙醇；

(3)上清液加入等体积氯仿-异戊醇混合溶液，混合溶液中的氯仿∶异戊醇 体积比为24∶1，缓慢上下颠倒30次，10000rpm离心10min，取上清1mL加到1.5mL 离心管中；

(4)加入权利要求1方法制得的石榴状磁性纳米粒子聚集体分散液10μL， 充分混匀，静置5min，磁性分离，沉淀用无水乙醇洗3次，自然挥发30min；

(5)加入100μLTE缓冲液，37℃水浴孵育5min，混匀后磁分离，取上清， 即为转基因大豆DNA洗脱液；

所述TE缓冲液组成为：10mM Tris-HCl、1mM乙二胺四乙酸二钠，pH8.0。

5.权利要求1所述的制备方法所制得的石榴状磁性纳米粒子聚集体的应用， 其特征在于用于动植物DNA的分离纯化。