[发明专利]回收Cohn氏组分Ⅳ沉淀中白蛋白的方法

说明书

技术领域

本发明涉及血制品的分离方法，具体是采用低温乙醇法从Cohn氏组分 IV沉淀中分离回收白蛋白的方法。

背景技术

低温乙醇工艺分离血浆蛋白，自20世纪40年代创建以来，至今已有60 年的历史。Cohn教授及其领导的开发团队所创立的Cohn 6法已成为白蛋 白分离的经典方法，是国际上通用的血浆白蛋白分离工艺的基础。随后所 使用的各种白蛋白分离方法依旧以Cohn 6法中的pH值、温度、乙醇浓度、 离子强度和蛋白浓度5项参数为依据，通过不同的参数组合，可进行其它 多种蛋白制品的分离。

Cohn氏组分IV沉淀中残留有少量白蛋白。从人血组分IV沉淀中分离白 蛋白的方法基本使用低温乙醇法和热乙醇法。低温乙醇法是在低温下，以 乙醇作为溶剂，利用白蛋白与其它杂蛋白结晶条件的不同而将白蛋白与其 它杂蛋白分离。《中国药业》2003年第12卷第04期《从Cohn氏组分IV 沉淀中回收白蛋白的低温工艺》，在低温乙醇法的基础上进行改进，控制温 度、乙醇浓度、酸碱度，提取组分IV沉淀中残留的白蛋白，每千克组分IV 沉淀可回收白蛋白50g左右。

热乙醇法是将组分IV沉淀配制成蛋白液，加热使蛋白液中的杂蛋白变 性固化，再通过加压过滤使固液分离，将滤液超滤浓缩得到白蛋白粗制品， 如CN1660898A、CN1660903A公开的方法，但回收率也不高。

发明内容

本发明的目的提供一种从Cohn氏组分IV沉淀中回收白蛋白的方法，该 方法是在低温乙醇法的基础上，选择适当的温度、乙醇浓度、酸碱度的参 数组合，使白蛋白与其它蛋白分离，大大提高白蛋白回收率。

本发明方法包括以下步骤：

A.取组分IV沉淀，加入组分IV沉淀重量的8±0.5倍的0～2℃，重量浓 度0.75±0.03％的NaCl溶液，搅拌溶解后，用醋酸/醋酸钠缓冲液和/或 NaHCO₃水溶液调整pH值至6.90±0.10，搅拌5-7小时成为反应液；

B.用醋酸/醋酸钠缓冲液调整反应液pH值至5.70±0.05，降温至 -0.5±0.5℃，喷雾加入体积浓度大于60％的乙醇，反应液逐渐降低温度至 -4.5±0.5℃，乙醇加入量为反应液中乙醇的体积浓度达到40％，乙醇加完 后，将反应液pH值调整在5.85-5.90，继续搅拌1～3小时，静置8小时以 上，然后将反应液离心过滤，取滤液；

C.滤液用含0.4±0.1mol/L醋酸和体积浓度40±1.0％乙醇的醋酸-乙醇 混合溶液调节至pH值为4.70±0.10，搅拌1～3小时，在-9.0±1.0℃静置8 小时以上，过滤，收集沉淀物即粗制白蛋白；

D.将粗制白蛋白纯化、浓缩、巴氏病毒灭活，可配制成注射用人血白 蛋白。

在步骤A中，NaCl溶液最好分两次加入，第一次加入组分IV沉淀重量 的2～4倍，反应液搅拌成糊状，再补加剩余的NaCl溶液。

喷雾加入的乙醇体积浓度优选为75～95％。

本发明方法通过选择pH值、乙醇浓度、酸碱度和温度，使组分IV沉淀 中的白蛋白与其它蛋白充分分离，每公斤组分IV沉淀可制得白蛋白 110～120克，使血浆中白蛋白的总提取率提高到93％以上。

具体实施方式

一、组分IV沉淀的解冻及溶解

从-30℃以下冷库中取出组分IV沉淀，称重后置于洁净的不锈钢反应罐 中，向反应罐中泵入组分IV重量的3倍的0～2℃，0.75wt％的NaCl溶液， 搅拌溶解，反应液成为糊状。

完全溶解后，将反应液pH值调至6.90±0.10，并在该pH条件下搅拌 5～7小时，搅拌速度为1400～1500rpm。

再补加组分IV重量的5倍的0-2℃，0.75wt％的NaCl溶液，充分搅拌 均匀。

二、沉淀分离其它蛋白

向反应液中喷雾加入pH值4.0的醋酸/醋酸钠缓冲液，加入速度 150～200ml/min，将反应液pH值调至5.70±0.05，将反应液温度降至 -0.5±0.5℃。

喷雾加入95％(v/v)乙醇，反应液逐渐降温至-4.5±0.5℃，乙醇加入 量为反应液中乙醇的体积浓度为40％。