[发明专利]用低剂量MPTP建立雄性猕猴慢性帕金森病模型的方法

说明书

技术领域

本发明属生命科学技术领域，具体涉及一种建立帕金森病灵长类动物模型的方法。

背景技术：

帕金森病(PD)是仅次于阿尔茨海默病的第二大中枢神经系统退行性疾病。该病一般在50岁至65岁开始发病，发病率随年龄增长而逐渐增加，60岁发病率约为1‰，70岁发病率达3‰至5‰。帕金森病早期主要表现包括静止性震颤、肌强直、行动缓慢、动作启动困难以及姿势异常等。静止性震颤即患者的手或臂不受控制地发抖，在休息时出现或情绪紧张时加重；其他早期症状包括开始活动时感到困难，其后双臂和双腿经常震颤，上肢不能作精细运动，乃致日常生活不能自理，如穿衣、洗漱感觉困难。帕金森病还常伴有抑郁、焦虑、肢体酸痛不适、多汗、流涎等。因此，帕金森病给家庭社会带来沉重的负担。

当基底节中多巴胺(dopamine，DA)含量减少70％时，才开始出现临床症状。因此，去医院就诊的帕金森病患者脑内已出现不可逆的损伤。要在疾病早期进行诊断，建立一个合适的动物模型显得犹为重要。几十年来，研究者建立了多种多样的帕金森病动物模型。从最早的利血平模型、甲基苯丙胺模型到6-羟多巴模型和1-甲基-4-苯基-1，2，3，6-四氢吡啶模型(MPTP模型)。最近发现系统的给予农药杀虫剂鱼藤酮能在大鼠模型上产生明确的PD症状。

利血平和甲基苯丙胺都是通过耗竭脑内单胺类神经递质使动物出现骨骼肌僵硬、震颤、舔毛等与帕金森症相似的症状。这两种模型都属于急性损伤模型，不能完全复制原发性帕金森病的病理变化。并且实验对象为啮齿类动物，不能为人类帕金森病提供很好的信息。

6-OHDA与DA有很强的化学相似性，因此能在儿茶酚胺能神经元内特异性聚集，对大鼠、小鼠、猫和灵长类动物均有神经毒性。6-OHDA(8～12μg)注射于纹状体或内侧前脑束，可以造成大鼠的运动平衡障碍，如躯体弯曲、运动不能、肌强直等。随着病程延长，动物会出现吞咽和呼吸困难。6-OHDA单侧损毁制备的PD动物模型在病理、生化方面的表现同人类PD有不少相似之处，如黑质DA能神经元变性、死亡、缺失，胶质细胞增生，黑质和纹状体TH活性及DA含量降低。另一优点是在系统注射DA受体激动剂L-DOPA或促DA释放药物后，可导致不对称的、能够定量化的异常运动行为。因此，药物诱发的旋转行为的量化是评价抗PD药物疗效稳定可靠的指标。缺点是该模型仍属急性损伤模型，不能模拟PD慢性进行性病程特点，不能用于长期神经保护研究中。病理方面也与人类PD有一定差异，如无细胞内包涵体Lewy小体。而且6-OHDA不能透过血脑屏障，只能通过脑内直接给药才能造成黑质神经元的损伤。这样，为在灵长类上的应用增加了一定的难度。

鱼藤酮是一种从植物中提取的天然有机杀虫剂，具有高亲脂性，容易透过血脑屏障，对脑组织线粒体复合酶I具有很强的抑制作用。制备模型的神经毒素来源于自然环境，其慢性暴露的制作方式能较好地模拟PD发病过程，在病理、生化、发病机制、行为改变等方面均能较好地模拟人类PD的相关特征。由于产生类似Lewy小体的α-synuclein阳性包涵体，它成为研究Lewy小体形成的分子机制的有效工具。该模型对研究环境因素与PD病因及发病机制之间的关系具有独特的价值。其慢性、进行性病程特征还特别适合PD的神经保护治疗研究。缺点是鱼藤酮因为其亲脂性，可以进入所有细胞中，并不选择性的累积在DA能神经元中。同时，制备过程费时、费力，不同动物个体的制备效果不一(有些动物无明显毒性效应)。