[发明专利]一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法，采用有机溶剂提取，活性炭脱色和硅胶柱分离纯化等工序制备东北贯众素的方法。

背景技术：

东北贯众素，又名绵马贯众素，是一种四环间苯三酚衍生物。

英文名称：Dryocrassin；

分子式：C₄₃H₄₈O₁₆；

分子量：820.83；

分子结构式：

物理性质：为黄色结晶(丙酮)，熔点201-203℃(也有报道207-214℃、215-218℃)；难溶于水，可溶于苯，乙醚，四氯化碳，戊醇，丙酮，冰醋酸等多数有机溶剂及碱性水溶液。

东北贯众素是绵马贯众抗疟活性及抗肿瘤活性的主要有效成分，有研究证明其具有抗日本血吸虫作用。

绵马贯众为鳞毛蕨科植物粗茎鳞毛蕨(东北贯众)Dryopteris crassirhizomaNakai的干燥根茎及叶柄残基。呈倒卵形，上端钝圆或截形，下端较尖，表面黄棕色至黑褐色，密被排列整齐的叶柄残基及鳞片，并有弯曲的须根。具有清热解毒、驱虫的功效，用于虫积腹痛、疮疡。其炭品止血，用于崩漏。主要化学成分为东北贯众素、绵马酸类、黄绵马酸类以及微量白绵马素、粗蕨素、绵马三萜、鞣质、挥发油、树脂等。

目前还未见有关于东北贯众素提取纯化工艺的相关研究。吴寿全等发表了《绵马贯众化学成分研究I》，提取分离得到了东北贯众素单体，但此方法只适合实验室。王海宁等优选出适合分离绵马贯众中东北贯众素的大孔树脂为DM130，并对优选出的大孔树脂分离绵马贯众时的工艺条件和参数进行研究，但是东北贯众素水溶性很差，大孔树脂分离难度较大，不易操作。

发明内容：

本发明要解决的技术问题是提供一种从植物绵马贯众中提纯东北贯众素的方法，该法能有效提取高纯度产品，便于工业化操作。

本发明是采用以下技术方案实现的：

将原料粉碎，加入乙醇溶液和氢氧化钙，加热提取2-3次，合并提取液滤过调节pH5-7，回收乙醇至浓度30-50％，放置8-12小时，滤出沉淀物，氯仿溶解加活性炭加热脱色，滤后注入硅胶柱，先用4-6柱体积甲醇洗去杂质，再用乙酸乙酯洗脱，TLC监测，收集洗脱液，减压回收洗脱剂；用丙酮溶解结晶，滤出低温干燥即得产品。

所述的提取条件：乙醇浓缩度80-90％，用量为物料的5-7倍，氢氧化钙和物料比1∶1000-2∶1000，温度50-75℃，提取时间1-3小时。

所述活性炭脱色条件为：活性炭为767针剂活性炭，加入量为溶液体积量的1-2％，回流脱色1-2小时。

所述硅胶柱分离条件：硅胶用量为沉淀物的15-20倍，4-6柱体积甲醇洗去杂质。

所述重结晶条件：丙酮加热饱和溶解粗晶，冷却静置析晶，结晶2-3次。

综上所述，本发明存在以下优点：

1)碱醇提取，试剂损耗少，低浓度乙醇结晶除杂效果好；

2)767针剂活性炭脱色效果好，硅胶柱洗脱试剂单一易回收。

下面将结合具体实施方式进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。

具体实施方式：

下述实施例中东北贯众素的监测采用薄层色谱法(参照马国祥等“薄层色谱扫描法测定7种贯众中东北贯众素及绵马酸ABA的含量”)

薄层色谱条件：

薄层板制备：取硅胶G10g，加磷酸氢二钠-柠檬酸的缓冲液(pH＝7)10ml，维生素C100mg及0.5％CMC-Na溶液20ml，调匀，铺在20cm×20cm的薄层板上，晾干，于50℃活化2h。

展开剂：正己烷-氯仿-甲醇(30∶15∶1)；

先将点上样的板放在展开缸中饱和2h后，展开，展距为18cm，0.3％固兰B盐的50％乙醇溶液为显色剂，多次喷雾，晾干后，于40℃条件下显色，保持1h显色完全。

下述实施例中东北贯众素的检测采用高效液相色谱法(参照肖国君等“HPLC测定绵马贯众中绵马贯众素的含量”)

高效液相色谱条件：

色谱柱：VP-ODS(4.6mm×150mm，5μm)；

流动相：乙腈-氯仿-异丙醇-0.3％磷酸-0.1％十二烷基硫酸钠(50∶10∶35∶10∶5)；

流速：1.0mL·min^-1；

检测波长：286nm；

柱温：25℃。

实施例1：