[发明专利]2型糖尿病肾病模型的制备方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种用于对糖尿病肾病进行研究的模拟对象，尤其涉及一种2型糖尿病肾病模型制备方法。

背景技术

糖尿病已日益成为全球的公共健康问题，通常分为2种类型，其中2型糖尿病占整个糖尿病的90％以上。糖尿病肾病是糖尿病常见的慢性并发症之一，其发病机制仍不十分清楚。越来越多的研究证实足细胞损伤在糖尿病肾病发病机制中起十分重要的作用。足细胞是一高度分化的终末期细胞，现有的小鼠永生系足细胞为体外研究足细胞损伤提供了重要的保证，在体内研究中，建立一种尽量模拟人类2型糖尿病肾病发病过程的动物模型无疑有助于我们深入了解足细胞损伤机制，从而阐明糖尿病肾病其发病机制，更好地防治糖尿病肾病。

大量的临床和流行病学资料显示，胰岛素抵抗是2型糖尿病发病的初始环节。是否具有胰岛素抵抗特征是2型糖尿病动物模型的关键。目前有关2型糖尿病肾病早期肾脏损害的研究模型较少，糖尿病模型制备方法分别有自发性或遗传性动物模型、化学药物药物诱导法、高糖高脂饲料诱导法、手术切除胰腺法和转基因动物等方法，但这些方法所建立的模型均不能完全反映2型糖尿病的病理及病理生理变化特点。

发明内容：

本发明提供一种能模仿人类2型糖尿病肾病的发病经过、具备2型糖尿病肾病经常合并的肥胖、高血压、高血脂和胰岛素抵抗特点的2型糖尿病肾病动物模型的制备方法。

本发明的技术方案如下：

一种2型糖尿病肾病模型的制备方法，

步骤1挑选研究大鼠：选择6周龄雄性SHR大鼠，所述雄性SHR大鼠出生时血压正常，4周时血压开始上升，

步骤2高糖高脂饲料喂养诱导胰岛素抵抗：对由步骤1选择的雄性SHR大鼠经过适应性喂养一周后，予以高糖高脂饲料喂养2周，检测体重、血脂、血糖和胰岛素浓度，计算稳态模型评价的胰岛素抵抗指数，如果胰岛素抵抗指数≥3.8，则进入步骤3，所述高糖高脂饲料的组分及质量配比如下：

猪油10.0％，蔗糖20.0％，胆固醇2.5％，胆酸盐1.0％，常规饲料66.5％，

步骤3腹腔注射小剂量的STZ：对胰岛素抵抗雄性SHR大鼠禁食12小时后予以小剂量STZ(35mg/kg)一次性腹腔注射，所述小剂量为35mg/kg，72小时测随机血糖，以血浆葡萄糖≥16.7mmol/L为2型糖尿病造模成功。

本发明通过高糖高脂喂养联合小剂量STZ注射自发性高血压大鼠(SHR)诱导出具有胰岛素抵抗、高血压、高血脂、蛋白尿和足细胞损伤的新型2型糖尿病肾病模型。

发明的优点：具有操作简单、经济实用、造模成功率高等特点，而且能模仿人类2型糖尿病肾病的发病经过，具备2型糖尿病肾病经常合并的肥胖、高血压、高血脂和胰岛素抵抗等特点，病理学检查符合2型糖尿病肾病的病理变化。产生此优点的原因与以下因素有关：1.研究对象的选择。我们选择6周龄的自发性高血压雄性大鼠作为研究对象，而且其本身无明显原发性肾脏或肾上腺损伤，雄性SHR大鼠较雌性更容易患病。2.诱导胰岛素抵抗：采用高糖联合高脂饲料喂养2周，结果其体重增加，无明显的高血糖，胰岛素浓度增加，计算HOMA-IR，结果显示成功诱导出胰岛素抵抗。3.小剂量STZ单次腹腔注射：在成功诱导出胰岛素抵抗后，予以禁食12小时后而不是随机用小剂量STZ，这样更容易破坏胰腺部分功能，而不至于破坏全部胰腺功能，造成胰岛素相对缺乏，符合2型糖尿病的发病特点。

附图说明

图1是本发明的流程图。

图2是各组大鼠血压变化情况图(*P＜0.01VS WKY)。

图3是造模8周后对照组与模型组光镜病理变化图(PAS×400)。

图4是造模8周后扫描电镜观察结果图(×8,000)。

图5是造模8周后透射电镜观察结果图(×15,000)。

具体实施方式

实施例

一种2型糖尿病肾病模型的制备方法，

步骤1挑选研究大鼠：选择6周龄雄性SHR大鼠，所述雄性SHR大鼠出生时血压正常，4周时血压开始上升，

之所以选择6周龄SHR大鼠其作为本实验的研究对象，是因为SHR大鼠属于自发性高血压模型，源于东京远交系Wistar大鼠，高血压发生率高，且无明显原发性肾脏或肾上腺损伤，同时由于雄性SHR大鼠较雌性更容易患病，其出生时血压正常，4周时血压开始上升；