[发明专利]一种短小芽孢杆菌及其用途

说明书

技术领域

本发明属应用微生物技术领域，更具体说，本发明涉及一种短小芽 孢杆菌。同时，还涉及所述的短小芽孢杆菌在烟草生产中的新用途。

背景技术

烟草是我国财政的重要支柱之一。国家烟草专卖局在“十一五”中国 卷烟科技发展纲要第7条明确指出，要“攻克影响烟叶香气质、香气量的 关键技术”，缩小与国外烟叶质量差距，以提高国内外市场竞力。

烟叶发酵是烟草加工过程中的主要工艺环节。改进烟叶发酵技术， 增进烟叶的香吃味质量，已成为卷烟工业提高加工工艺技术水平的重要 手段。由于当年新购烟叶品质都存在不同程度的缺陷，不宜直接用于卷 烟生产，必须经2-3年的醇化处理才可用于生产。在醇化发酵过程中，烟 叶主要化学成分会发生相应的变化，青杂气和刺激性逐渐降低，香气显 露，吃味醇和，色泽均匀并加深，故而烟叶醇化在卷烟工业中对烟叶质量 的改变起着非常重要的作用。

研究表明，在烤烟醇化中期和醇化完成时，烟叶中均存在一定数量 的微生物，其中以细菌为主，烟叶表面的微生物数量和种类与醇化条件 和醇化效果有密切关系。总之，微生物不仅可以通过自身的生命活动作 用于烟叶的醇化过程，而且还通过其代谢产生的生物酶参与烟叶的生理 生化反应，促进烟叶中大分子生物化合物的转化。

国内近期的研究表明通过微生物发酵能够大大缩短烟叶醇化的时间， 具有明显消除烟叶的青杂气，减轻刺激性的作用，对烟叶香气质量的改 善也有一定的帮助。目前，关于添加微生物提高烟叶品质的研究已有报 导。但经文献检索，尚未发现与本发明内容相同的公开报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种新的短小芽孢杆菌。

本发明进一步的目的是提供一种所述的短小芽孢杆菌在烟草生产中 的应用，即提供一种能有效提高烤烟品质的方法。

本发明的目的通过下述技术方案予以实现。

*除非另有说明，本发明中所采用的百分数均为质量百分数。

A.本发明从烤烟叶面上分离了一株优势微生物Van35作为试验菌 种，对其进行了16S rRNA分析，鉴定结果表明该细菌属于短小芽孢杆 菌，其分类命名为Bacillus pumilus Van35。保藏号为CGMCC No.3411。

短小芽孢杆菌Van35(B.pumilus Van35)菌株的形态学和生理生化性 质特征为：菌体呈杆状，革兰氏阳性，芽孢椭圆形中生或端生，不膨大， 芽孢比菌体小存在于菌体中。菌落呈圆形，扁平无凸起，乳白色，有光 泽，边缘不整齐。常规生理生化实验表明：Van35是好氧菌，过氧化氢酶 实验，VP实验，产H₂S实验，明胶液化实验和卵磷脂酶实验呈阳性；水 解淀粉实验，产NH₃实验，甲基红实验，吲哚实验，水解脂肪实验和硝 酸盐还原实验呈阴性。

短小芽孢杆菌Van35的分子鉴定特征为：利用通用引物20F (5’-AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’)和1500R (5’-GGTTACCTTGTTACGA CT-3’)，以短小芽孢杆菌Van35的基因组 DNA作为模板扩增得到1500bp左右的PCR产物，回收测序、校正之后 得到的Van35菌株的部分16S rRNA基因序列1510bp，该序列已经递交 国际核苷酸序列数据库(GenBank)，序列索引号为：GU290547。

本发明的短小芽孢杆菌制剂按常规方法制备，即将短小芽孢杆菌 Van35(B.pumilus Van35)扩大发酵培养后制成菌制剂。

B.本发明提供了一种所述短小芽孢杆菌在烟草生产中的应用，即提 供一种利用短小芽孢杆菌提高烤烟品质的方法。其具体作法如下：

利用短小芽孢杆菌Vasn35，制备液体培养液。1000mL培养液离心， 用无菌水洗涤沉淀，最后用20mL无菌水振荡均匀，使用时稀释10倍 即为菌剂。称取预先平衡水分至13％的烟丝200g，喷施Van35(B.pumilus Van35)菌剂40mL，对照组喷施等量无菌水。将处理后的烟叶样品放入 22℃，60％的恒温恒湿箱内发酵20天。

与现有技术相比，本发明具有以下突出的优点：

1.试验数据表明，短小芽孢杆菌能有效提高烤烟品质。本发明成功地 将生物技术引入烟草生产中，是烟草生产技术的一个重要突破；