[发明专利]一种乳源抗菌肽的制备方法

说明书

技术领域

本发属于添加剂领域，具体涉及一种在动物技术领域中作营养食物的乳 源抗菌肽的制备方法。

背景技术

乳源抗菌肽(Casein Glyco Macro Pept ide，CGMP)是乳中κ一酪蛋 白的一个多肽片段，通常作为酪蛋白胶束的一部分，通常此可溶性的多肽含 有较多的糖链，于是被称为“糖巨肽”，而酪蛋白来源的此类肽都统统称 为“乳源抗菌肽”(CGMP)。κ一酪蛋白来源的CGMP的氨基酸序列已清 楚，它是由从κ一酪蛋白的N末端106位氨基酸(Met)开始至169位C 末端(Val)结束的64个残基构成的。牛的CGMP有A和B2种遗传变异型， 其不同在于该多肽链的136位和148位的氨基酸不同，A型的136位和148 位残基氨基酸分别为Thr和Asp，而B型为Ile和Ala。此外该堕胎的131、 133、135、136和142位的苏氨酸残基为配糖体化的部位，149位饿丝氨酸 为磷酸化的部位。

一般来说，CGMP多肽链的分子质量约为9ku，但随pH变化而变化，在 酸性范围内如pH3.5，大约为10～30ku，中性条件如pH7.0，为20～50ku左 右。许多CGMP的生产制备方法就基于CGMP的此特性，利用超滤进行分离 纯化。

经胃蛋白酶处理κ-酪蛋白产生的CGMP中含有大量的活性多糖，包括：

(1)单糖GalNAc-O-R；

(2)双糖Gal β1→3GalNAc-O-R；

(3)三糖NeuAc α2→3Gal β1→3GalNAc-O-R；

(4)三糖Gal β1→3(NeuAcα2→6)GalNAc-O-R；

(5)四糖NeuAc α2→3Gal β1→3(NeuAc α2→6)GalNAc-O-R

其中：Gal是半乳糖；GalNAc是N-乙酰半乳糖胺；NeuAc是唾液酸。

涎酸是乳源抗菌肽中含量较高的活性单糖。它是神经氨酸的涎基诱导体 的总称，涎酸的pH值约为2.6，在自然界中主要以N-乙酰神经氨酸(Neu5Ac) 形式广泛存在于植物之外的生物体中。研究表明涎酸具有许多的生理功能， 最主要的生理功能是在生物体内防御机制中起较重要作用。人的母乳中含有 高浓度的涎酸，经大量研究发现其与乳婴儿的发育以及感染防御机制具有较 大的关系；此外，最新研究显示涎酸还具有抑制引起下痢原因的病毒感染作 用和提高学习能力的效果，同时，一部分的涎酸可移至脑内，从而与脑的发 育具有较大的关系(WARREN，1959)。而乳中约75％以上的涎酸存在于CGMP 中，因此其生理功能不言而喻。

与CGMP有关的大量体外及体内实验显示，该多肽具有多种生理活性功 能。乳源抗菌肽的生理功能主要有：

它能结合霍乱和埃希氏大肠杆菌的肠毒素。研究已表明 (KAWASAKI，1992)霍乱毒素业单位A和B的受器是一种神经节苷脂，这种 神经节苷脂与乳源抗菌肽的寡糖结构类似，因此，CGMP有结合霍乱毒素和埃 希氏大肠杆菌毒素的特性。

乳源抗菌肽能抑制病原体包括病毒和细菌等黏附至细胞，保护机体免受 病原体的感染。研究表明，CGMP能减弱龋齿发生的机制是CGMP能使产生牙 齿噬菌斑的微生物组成发生改变，使其微生物群由葡萄球菌变为由很弱致癌 性的防线菌组成，研究同时发现乳源抗菌肽不仅抑制龋齿而且可使牙齿重新 无机化。

乳源抗菌肽能抑制胃分泌物。有关乳源抗菌肽与胃肠道收缩关系的材料 引起了人们的广泛兴趣。Stan(Stan Eya.，1983)等人认为减弱胃分泌物将 会降低动物胃蛋白水解作用，这样会保护乳中来源的免疫球蛋白、乳铁蛋白 及溶菌酶等蛋白质原封不动的穿过胃，这会有益于婴儿以及免疫力低下的人 增强免疫力。

能促进双歧杆菌的生长。在鉴别双歧杆菌的一项研究中，Gyorzy等人发 现以N-乙酰神经胺酸结尾的寡糖能促进双歧杆菌的生长，并且他们提出这是 由于末端的N-乙酰神经胺酸脱落，暴露了一个GalNAc的缘故。

具有调节免疫系统的反应的功能(AZUMA，1984)。乳源抗菌肽能抑制由 LPS激发的B淋巴细胞增殖和由PHA(植物血凝集素-P)激发的T淋巴细胞增 殖。其进一步影响是下调免疫系统和减弱口腔的耐受性，这将会给一个刚出 生的动物一种能够被保护的机制，使动物能抵抗环境内很宽范围内的抗原。