[发明专利]小尾寒羊耳缘组织的cDNA文库及其构建方法

说明书

技术领域：

本发明涉及一种cDNA文库及其构建方法，具体地说是利用小尾寒羊耳缘组织通过提取总RNA、合成双链cDNA、蛋白酶K消化、Sfi 1酶切并连接入载体、λ噬菌体的包装，最终获得小尾寒羊耳缘组织cDNA文库。

背景技术：

生物种质资源是人类繁衍和发展的最根本物质基础和战略资源。随着人口持续剧增、资源相对短缺、环境日益恶化、需求不断膨胀等几大矛盾的突现，人类为了生存而实施农业集约化养殖，生物种质资源正在受到严重威胁，其遗传多样性正在迅速地被耗散和侵蚀。加强对生物种质资源地保护和合理利用，意义重大，任务紧迫。畜禽种质资源是生物多样性的一部分，与人类关系最密切。畜禽种质资源直接影响畜牧业生产和人类生活，是育种学家进行改良育种的基本素材，是人类生存、社会进步和可持续发展的物质基础，是人类所需食物的最直接来源。

全球畜禽种质资源主要分布于亚太地区，其中原始地方种质资源占较大比例，如中国、印度、欧洲的畜禽种质资源也很丰富，许多高产品种来源于欧洲。当今世界畜禽品种资源日趋贫乏。随着畜牧生产体系的集约化，在多数发达国家里，大量饲养的只是少数经济价值高的品种和杂交种，品种数目在迅速减少；在一些发展中国家里，虽然有较丰富的遗传资源，但由于保种不当和盲目引进外来品种杂交，使原有的地方品种的数量大大减少。这都导致了世界性的遗传资源危机。据最近统计，全球6165个畜禽品种中，有740(占12％)个已经灭绝、531个濒临灭绝(占8.16％)、1092个处于濒危(占17.71％)，状况不清楚的有1407个(占22.8％)，非危机的只有2395个(占38.8％)。1999年已经灭绝、濒 临灭绝及濒危的品种占品种总数的比例较1995年所占比例分别增加82.9％、37.54％、19.2％，世界范围内的畜禽种质资源危机程度日益加剧。

我国是世界上畜禽遗传资源最为丰富的国家之一，特别是地方品种的优异种质特性是几千年来在多样化的自然生态环境下，劳动人民长期选育的结果。许多地方品种拥有一些宝贵的特色，如耐粗饲、肉质好、抗逆性强、有害基因频率低等。在世界性畜禽资源趋于枯竭的今天，这些丰富的遗传资源对世界畜牧业的发展有着重要的意义。但是近年来，由于生态环境的不断恶化、国外畜禽品种的引进和集约化养殖等原因，导致我国这些优良地方畜禽品种的灭绝或濒临灭绝。挽救濒危品种，保存种质资源已成当务之急。

随着转基因技术和体细胞克隆技术的发展和不断完善，为畜禽基因资源的保存提供了新的方法和途径，cDNA文库等新方法逐渐成为资源保存较为理想的方法。自20世纪70年代中期首例cDNA克隆问世以来，构建cDNA文库已成为研究功能基因组学的基本手段之一。cDNA便于克隆和大量表达，它不像基因组含有内含子而难于表达，因此可以从cDNA文库中筛选到所需的目的基因，并直接用于该目的基因的表达。通过构建cDNA表达文库不仅可保护濒危珍惜生物资源，而且可以提供构建分子标记连锁图谱的所用探针，更重要的是可以用于分离全长基因进而开展基因功能研究。因此，cDNA在研究具体某类特定细胞中基因组的表达状态及表达基因的功能鉴定方便具有特殊的优势，从而使它在个体发育、细胞分化、细胞周期调控、细胞衰老和死亡调控等生命现象的研究中具有更为广泛的应用价值，是研究工作中最常使用到的基因文库。

随着科技的发展和人们物质生活需求的不断提高，畜牧业生产正朝着高产、优质、抗逆、抗病及集约化的方向快速转变和发展，而人们在追求经济利益对一些畜禽品种进行改良的同时也造成了大量畜禽遗传资源的丢失。cDNA文库中含 有大量的已知和未知基因，通过构建优良畜禽品种不同组织的cDNA文库不仅可以永久保存畜禽的基因资源，而且可以为畜禽遗传资源研究提供宝贵的实验材料。