[发明专利]一种无特定病原体级东方田鼠的培育方法

说明书

技术领域

本发明涉及一种医药制品、生物技术领域的无特定病原体(简称SPF)级实验动物的培育方法，特别是SPF级东方田鼠的培育方法。

背景技术

东方田鼠隶属仓鼠科(Cricetidae)、田鼠亚科(Microtinae)、田鼠属(Microtus)，是常见的啮齿动物，在我国分布极广，北至黑龙江、南至广东省，共覆盖了18省、市、自治区。

早在上世纪50年代人们就注意到东方田鼠对日本血吸虫具有天然抗感染性，近年来科研工作者们对普通环境下饲养和繁殖的东方田鼠从其遗传学、生物学、抗血吸虫病机理等多方位进行了较为系统的观察研究，发现其除了具有抗血吸虫感染的特性外，还对高脂饲料敏感易发生非酒精性脂肪肝，并且在肿瘤研究方面也有一定价值。

野外或未经净化的东方田鼠携带着多种致病病原体，有学者从东方田鼠中检测到多杀巴斯德杆菌、支气管鲍特杆菌、金黄色葡萄球菌、贾第虫、鼠六鞭毛虫、其他肠道鞭毛虫、螨、虱等病原体和寄生虫，还有学者从东方田鼠体内分离到汉坦病毒。因此要充分利用东方田鼠资源，必须对东方田鼠进行净化使其达到SPF级，才能进行实验动物化，提供安全、理想的实验用东方田鼠，为其在疾病研究方面贡献应有的价值。

据文献报道，有学者试图采用药物净化的方法，获得SPF级东方田鼠，如：柏熊等在2006年《上海畜牧兽医通讯)》第6期中描述了一种采用药物净化法来获得SPF级东方田鼠的方法：通过用双甲脒给东方田鼠洗澡，口服甲硝唑及肌肉注射红霉素和利巴韦林的方法净化东方田鼠。但药物净化方法存在以下缺陷：获得的动物在细菌和寄生虫检测时，均能发现一些在啮齿类清洁级动物中不该存在的细菌、病毒和寄生虫。

为此，需要研究提供一种新的获得高级别的SPF级东方田鼠的方法，这将对东方田鼠在抗日本血吸虫和非酒精性脂肪肝等方面的深入研究有独特的价值。

发明内容

本发明所要解决的问题是提供一种新的方法来获得SPF级东方田鼠，使之既不携带人兽共患病病原及动物烈性传染病病原、也不携带对动物有危害病原体或潜在感染、条件致病菌和对科研干扰大的病原体，能为科学研究提供准确、可靠的数据。

本发明解决其技术问题所采用的技术方案是：一种SPF级东方田鼠的培育方法，依次按以下步骤进行：

(1)受孕  东方田鼠雌雄配对同笼饲养，每笼饲养东方田鼠雌雄各一只，使雌鼠怀孕；

(2)确定孕鼠的剖腹时间  通过孕鼠触诊结合观察其外阴和乳房来确定东方田鼠孕鼠的剖腹时间；

(3)剖腹取胎术前的消毒准备  将手术隔离器彻底消毒，并将手术隔离器与大小鼠隔离器连接，手术器械高压灭菌和配制消毒液；

(4)东方田鼠剖腹取胎手术  将临产的东方田鼠脱颈椎快速处死，用酒精棉擦拭孕鼠腹部消毒，快速打开腹腔暴露子宫，医用止血钳夹住两个子宫角和子宫口，摘除子宫，取出经过药浴槽传入的手术隔离器，松开止血钳，小心挑破子宫露出仔鼠，剪断胎盘，用干药棉吸干仔鼠身上的羊水，刺激其下体促使其自主呼吸，直到身体泛红，通过联结袖将仔鼠传入大小鼠隔离器；

(5)代乳  东方田鼠仔鼠的代乳鼠为SPF级ICR小鼠和SD大鼠，代乳分两个阶段：初生东方田鼠仔鼠第1～5天由ICR小鼠代乳，出生第6～15天由SD大鼠代乳；

(6)微生物学和寄生虫检测  包括细菌、病毒和寄生虫三方面，检测项目为按GB14922.1-2001实验动物寄生虫学等级及监测和GB14922.2-2001实验动物微生物学等级及监测中大小鼠SPF级的必须检测项目。

步骤(1)所述东方田鼠，选自普通级封闭群中毛色光泽度好、发育正常、性情温和、受孕率高、产仔数多，且仔鼠生长发育良好、成活率高，连胎性高的雌性东方田鼠和体型健壮、性发育成熟的雄性东方田鼠。

步骤(5)所述东方田鼠仔鼠的代乳鼠是指：为非初次产仔且母性好、无食仔癖的母鼠，经检测均符合实验大小鼠SPF等级国家标准、饲养于大小鼠隔离器中的ICR小鼠或SD大鼠。

步骤(5)所述东方田鼠仔鼠分两个阶段代乳是指：初生第1～5天东方田鼠仔鼠由SPF级ICR小鼠代乳，挑选当日产仔的ICR小鼠作为代乳母鼠，将其仔鼠取出，将刚剖腹取胎获得的东方田鼠仔鼠与2～3只ICR仔鼠充分接触，随即放入大小鼠隔离器中的ICR母鼠饲养盒中实施代乳；出生第6～15天东方田鼠仔鼠由SPF级SD大鼠代乳，挑选当日产仔的SD大鼠作为代乳母鼠，将其仔鼠取出，将已由ICR母鼠代乳5天的东方田鼠仔鼠与2～3只SD大鼠仔鼠充分接触后，随即转移至大小鼠隔离器中的SD母鼠饲养盒中实施代乳，直至第15天离乳。