[发明专利]一种志贺氏菌的检测用引物及检测方法无效
| 申请号： | 201010105741.8 | 申请日： | 2010-01-29 |
| 公开（公告）号： | CN101845493A | 公开（公告）日： | 2010-09-29 |
| 发明（设计）人： | 钟青萍;王丽;陈红远;廖振林;方祥 | 申请（专利权）人： | 华南农业大学 |
| 主分类号： | C12Q1/68 | 分类号： | C12Q1/68;C12N15/11;C12R1/01 |
| 代理公司： | 广州粤高专利商标代理有限公司 44102 | 代理人： | 林丽明 |
| 地址： | 510642 广东*** | 国省代码： | 广东;44 |
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| 摘要： | |||
| 搜索关键词： | 一种 志贺氏菌 检测 引物 方法 | ||
1.一种志贺氏菌的检测用引物，其特征在于所述引物与志贺氏菌ipaH基因的1075～1267bp位的核酸序列的片段或片段的互补链互补。
2.根据权利要求1所述志贺氏菌的检测用引物，其特征在于所述引物序列如SEQ ID NO：1～4所示。
3.根据权利要求2所述志贺氏菌的检测用引物，其特征在于序列为SEQ IDNO：1的引物扩增片段为1075～1093bp；序列为SEQ ID NO：2的引物扩增片段为1248～1267bp；序列为SEQ ID NO：3的引物扩增片段为1135～1154bp的互补序列及1094～1111bp；序列为SEQ ID NO：4的引物扩增片段为1165～1184bp和1209～1227bp的互补序列。
4.使用权利要求1～3中任意一条权利要求所述引物检测志贺氏菌的方法，其特征在于包括如下步骤：(1)提取DNA作为模板；(2)环介导等温扩增反应体系为：模板2μL、引物各1μL、Bst DNA聚合酶1μL、扩增反应液7.5～12.5μL，加水至25μL的反应体系，63～65℃恒温反应1～1.5h；然后置于80℃下2～10min，终止反应；(3)结果观察：用肉眼观察到检测管出现浑浊为志贺氏菌阳性，无浑浊为阴性；或在检测管中加入核酸染料，置于320nm紫外光下观察，检测管为绿色的是志贺氏菌阳性，黄色的是阴性；或取3～5μL反应物，进行琼脂糖凝胶电泳，电泳图谱显示有产物特征阶梯状条带的为志贺氏菌阳性，反之为阴性。
5.根据权利要求4所述检测志贺氏菌的方法，其特征在于步骤(2)中所述扩增反应液包括10×聚合酶反应缓冲液、10mmol/L dNTP、150mmol/L MgSO4，三者的体积比为2.5∶4∶1。
6.根据权利要求5所述检测志贺氏菌的方法，其特征在于步骤(2)中所述扩增反应液包括10×聚合酶反应缓冲液、10mmol/L dNTP、150mmol/L MgSO4和5mol/L Betaine，其体积比为2.5∶4∶1∶0.5～5。
7.根据权利要求4所述检测志贺氏菌的方法，其特征在于步骤(3)中所述核酸染料为SYBR Green I、Goldview或EB替代物。
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