[发明专利]一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列

说明书

技术领域：

本发明属于生物技术领域，具体涉及一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列。

背景技术：

胶原是一种广泛存在于动物的结构蛋白质，是皮肤、软骨及结缔组织的主要成分。胶原分子是由3条螺旋型的肽链相互盘绕而成。目前，胶原蛋白已广泛地应用于医药工业、食品工业、日用化学品工业等领域。

目前，胶原产品主要来源于动物组织，制备过程复杂，环境污染严重。此外，异种来源的胶原蛋白用于人体时还存在以下几方面问题：动物来源的胶原蛋白制备时可能受动物病毒的污染，人体应用存在感染传染病的潜在危险；异种蛋白应用可能导致免疫排斥反应，导致使用部位的无菌性炎症或严重的过敏反应；人体移植后吸收率高，不能持续维持效果，需要重复注射。上述原因限制了异种胶原在人体中的应用。

来源于人体的重组胶原蛋白，氨基酸组成和结构明确，可以改进动物体胶原蛋白的水溶性、免疫排异性、稳定性、成胶性、吸收性等特性，生产不受原料的限制，因此应用领域更加广阔。E·武奥里奥等在其申请的发明专利(96199541.6)公开了一种新型人胶原蛋白、编码这些新型胶原蛋白的多聚核苷酸序列以及这些新型蛋白和多聚核苷酸在诊断和治疗疾病方面的用途。本发明还涉及IX型胶原蛋白与II型和/或X I型胶原蛋白的融合蛋白，以及将它们做为治疗剂的用途；范英娣在其发明专利(ZL01106757.8)中公开了一种类人胶原蛋白的氨基酸序列及根据该序列编码基因构建的工程菌，再通过诱导基因工程菌来生产这种类胶原蛋白的方法；姚菊明和杜春玲在其发明专利(200710070660.7)公开了一种重组类人胶原蛋白及生物合成方法，重组类人胶原蛋白包括由胶原区和非胶原区组成，胶原区和非胶原区都由特定的氨基酸序列组成，其中非胶原区位于胶原区的羧基端，非胶原区的氨基酸序列源于T4噬菌体次要纤维蛋白；杨树林等在其发明专利(200610098297.5)中公开了一种类人胶原蛋白基因、其不同重复数的同向串联基因、含有串联基因的重组质粒及制备方法。所公开的类人胶原蛋白基因由特定的碱基序列组成，并通过对该基因的体外酶切和拼接可获得不同重复数的串联基因，以及含有该不同重复数串联基因的重组质粒。

发明内容：

本发明的目的是提供一种人类胶原蛋白片段的基因及其编码的氨基酸序列，它可以从人类的cDNA文库中克隆胶原蛋白的编码基因，该编码基因通过基因重组技术，可以在真核表达系统(如酵母细胞或动物细胞)或原核表达系统(如大肠杆菌)中获得表达，经过分离纯化得到重组蛋白有望在医药和化妆品领域有广泛的用途。

为了解决背景技术所存在的问题，本发明是采用以下技术方案：从人类cDNA文库中获得了一种编码人胶原蛋白的cDNA序列，再根据该序列化学合成了人类胶原蛋白的核心基因片段，并将其中大肠杆菌的稀有密码子改变为其偏爱密码子，与特定表达载体连接后构建重组表达载体，将重组表达载体导入大肠杆菌构建了工程菌，建立人类胶原蛋白片段在工程菌中高效表达的发酵工艺，建立重组人类胶原蛋白片段的纯化工艺。

一种人类胶原蛋白片段的基因序列，该序列如下：

    ATGGGCCTTCAGGGTATGCCTGGTGAACGTGGTGCAGCTGGTCTTCCAGGGCCTA

AGGGTGACAGAGGTGATGCTGGTCCCAAAGGTGCTGATGGCTCTCCTGGCAAAGATGGC

GTCCGTGGTCTGACTGGCCCAATTGGTCCTCCTGGCCCTGCTGGTGCCCCTGGTGACAA

GGGTGAAAGTGGTCCTAGCGGCCCTGCTGGTCCAACTGGAGCTCGTGGTGCCCCTGGAG

ACCGTGGTGAGCCTGGTCCGCCAGGCCCTGCTGGCTTTGCTGGCCCACCTGGTGCTGAC

GGCCAACCTGGTGCTAAAGGCGAACCTGGTGATGCTGGTGCTAAAGGCGATGCTGGTCC

GCCTGGCCCTGCCGGACCCGCTGGTCCCCCTGGCCCTATTGGTAATGTTGGTGCTCCTG

GAGCCAAAGGTGCTCGCGGCAGCGCTGGTCCGCCTGGTGCTACTGGTTTCCCTGGTGCT

GCTGGCCGTGTCGGTCCTCCTGGCCCATCTGGTAATGCTGGACCGCCTGGCCCTCCTGG