[发明专利]天麻生化指纹图谱分类与品质鉴定技术及其应用

说明书

技术领域

本发明涉及中药和天然药物的鉴定与品质评价技术，具体涉及天麻的生化指纹图谱分类与品质鉴定和评价技术及其应用。 

背景技术

在所有质量控制系统中，生化指纹图谱技术被公认为是鉴定和评价中药和天然药物质量最有效的科学方法。生化指纹图谱的主要特征是不仅能显示不同来源的同种药物的共性，而且能显示同种不同遗传类群天然药物的特殊性，并能根据药物某些成分的峰面积对其进行定量分析和评价。在构建生化指纹图谱的所有方法中，高效液相色谱(HPLC)方法更精确、更实用，是构建生化指纹图谱的最常用方法。中国国家食品药品监督管理局已将HPLC指纹图谱列为中药和天然药物的质控标准。 

天麻是我国的名贵中药材。天麻及其有效成分天麻素具有许多药理作用。由于野生天麻越来越少，以劣质天麻冒充优质天麻，以非道地天麻冒充道地天麻，以人工种植天麻冒充野生天麻的事件时有发生。而天麻质量通常根据个体大小和成色，凭肉眼观察和经验确定。由于缺乏科学鉴定方法，有时将质量最差的天麻判定为最好的天麻。为了正确鉴定天麻真伪和质量，石上海等研究了天麻HPCL指纹图谱，王莉等研究了天麻指纹图谱模式识别，张炜等应用HPLC-DAD/MS技术建立了天麻质量评价方法。但是，这些方法测定天麻生化指纹图谱所化时间长，检出天麻素含量低，缺乏实用性，尤其不能用来对天麻进行分类和评价。陶钧等发明的天麻化学指纹图谱鉴定技术分离效果差，检出天麻生化成分少。因此，发明更加先进、实用的天麻生化指纹图谱分类与鉴定、评价技术具有重要意义和应用价值。 

发明内容

本发明的目的在于解决上述现有技术的不足，提供一种既能用于天麻植物分类和评价，又能对天麻产品质量进行鉴定和评价的先进、实用、快捷、灵敏高的生化指纹图谱技术。 

本发明另一目的在于提供测定天麻生化指纹图谱的优化参数。 

本发明还有一目的在于提供该技术在天麻适宜种植地区确定中的应用。 

本发明还有一目的在于提供该技术在天麻真伪鉴别中的应用。 

为实现上述目的，本发明采用以下技术方案： 

1、新鲜天麻样本的处理： 

采用传统方法将新鲜天麻样本蒸熟、烘干、研成粉末，过80目筛子，置80℃干燥箱中干燥1h。 

2、天麻生化成分的萃取： 

用电子天平精确地称取天麻粉末1g，置三角瓶中，加入70％乙醇溶液。将三角瓶与索氏萃取器相连，置97℃热水中热回流20min，用JY92-2D型超声波细胞破碎器处理20min(超声波处理9s；中间停顿2s；振幅功率250w)。超声波处理后称重，用70％乙醇溶液补充损失的重量。重复上述处理过程一次。萃取溶液用滤纸过滤。收集滤液，浓缩干燥后用10％乙腈溶液(流动相)定溶到10ml。用0.45μm滤膜过滤后，置冰箱中保存备用。 

3、天麻素对照品溶液的制备：用电子天平精确称取天麻素对照品(80℃干燥1h)10mg，置10ml容量瓶中，用10％乙腈溶液稀释至刻度，摇匀，用0.45μm滤膜过滤；置冰箱中保存至检测。 

4、天麻生化成分分离条件的优化筛选 

以柱温25℃，流速1ml/min，进样量20μl为基本色谱条件，用Agilent 1100高效液相色谱仪，Eclipse XDB-C₈(4.6×150mm，5μm)色谱柱，221nm波长紫外光光，分别以10％乙腈溶液和梯度浓度乙腈溶液(0～1.5min为纯水，1.6～3.5min为5％乙腈，3.6～8min为10％乙腈)为流动相，测定天麻素对照品的液相色谱图，确定天麻素对照品在不同流动相洗脱过程中的保留时间和峰面积。结果表明：流动相为10％乙腈溶液时，天麻素对照品的保留时间为1.9min(见附图1)；流动相为梯度浓度乙腈溶液时，天麻素对照品的保留时间为5.4min(见附图2)。但它们的峰面积均为24565。用10％乙腈溶液和梯度浓度乙腈溶液以及上述其他条件和参数分别测定天麻样本的生化指纹图谱，结果见附图3和4。比较两种流动相的分离效果发现，梯度浓度乙腈溶液比10％乙腈溶液分离效果好。前者分离出18种成分(见附图3)，而后者只得到9种成分，分离效果差(见附图4)。 

4、天麻生化成分检测条件的优化筛选