[发明专利]评估血清持久性有机污染物水平的前处理方法

说明书

【技术领域】

本发明涉及一种测定样本中某种物质含量的方法，具体地说，涉及一种利用气相色谱电子捕获检测器测定脐带血清中持久性有机污染物水平的前处理方法。

【背景技术】

测定生物样本中某种物质含量是评估人群暴露量的最客观、直接方式，但在流行病学调查实际操作过程中(特别是儿童人群)能获得生物样本量并不多。因此，在流行病学调查中，需要建立一种简单、方便，并且样本需求量小的评估测定方法。

多氯联苯和有机氯农药属于持久性有机污染物，它们具有持久性、脂溶性，主要通过食物链进入人体，也可以通过胎盘进入胎儿体内。动物实验表明这类物质有内分泌干扰作用，会影响后代生长发育。流行病学调查中主要通过测定生物样本(例如：血清、血浆、乳汁等)多氯联苯和有机氯农药的含量，了解其暴露水平，进而评估其对婴幼儿生长发育的影响。脐带作为连接母亲与孩子的“桥梁”，在输送营养物质的同时，多氯联苯、有机氯农药等污染物可通过胎盘屏障到达胎儿体内，因此经常通过测定脐带血清中这些物质含量来评估母亲暴露对下一代生长发育的影响。鉴于这个原因，本发明提供一种主要探讨血清中持久性有机污染物水平的前处理方法。

现有的评估测定方法主要包括：

①蛋白变性：蛋白变性剂的选择非常重要，在引起蛋白变性的同时又不会导致蛋白过度变性，进而发生蛋白与被分析物质的共沉淀现象。目前多利用甲酸、Na₂SO₄溶液、乙腈等作为蛋白变性剂；也有用1-丙醇作变性剂。每种变性剂的效果不同。

②萃取：血清成分比较复杂，除被测组分以外还有蛋白质、脂类等多种物质。在萃取被测组分的同时还要除去这些物质可能带来的干扰。在现有方法中，多为C18萃取柱和浓硫酸-硅胶柱联用。C18萃取柱不仅可以吸附被测组分，也可以除去血清中蛋白质的干扰；浓硫酸-硅胶柱主要用于去除脂类及其它一些极性物质。

③洗脱：目前多用正己烷和二氯甲烷混合液作为洗脱剂，正己烷是非极性溶剂，可以洗脱非极性物质；二氯甲烷是极性溶剂，主要用来洗脱极性物质。

现有的评估测定方法主要有如下不足：

①重复性欠佳：用Na₂SO₄溶液、乙腈、甲酸等作变性剂时，常常产生蛋白过量变性，血清变得粘稠，容易堵塞萃取柱，进而影响后续过程；C18萃取柱和浓硫酸-硅胶柱联用时，某些有机氯农药会和浓硫酸反应，影响回收率；除此之外，浓硫酸-硅胶柱需要现用现配，在配置过程中要保证浓硫酸和硅胶充分混匀，在长期配置过程中，很难确保浓硫酸和硅胶的比例及混匀程度均一致。这些因素均会导致重复性不好。

②操作过程繁琐：在前处理过程中，硅胶要300℃烘干过夜；配置浓硫酸和硅胶混合物质的玻璃容器要丙酮清洗后300℃烘干过夜；要保证浓硫酸和硅胶充分混合需要不断地搅拌、混匀；这些过程均增加了前处理过程的工作量，需要消耗大量时间。

【发明内容】

本发明的目的是提供一种简单、方便，并且标本需求量小的评估血清持久性有机污染物水平的前处理方法。

为实现以上目的，本发明公开如下技术方案：一种评估血清持久性有机污染物水平的前处理方法，包括(1)蛋白变性(2)萃取(3)洗脱(4)定容四个步骤，其中：

蛋白变性：蛋白变性剂为1-丙醇和超纯水混合液，体积比为V_1-丙醇∶V_超纯水＝15∶85；

萃取：C18萃取柱和碱性铝柱联用；

洗脱：洗脱液为正己烷和二氯甲烷混合液，体积比为V_正己烷∶V_二氯甲烷＝80∶20；

定容：将含有被测物质的洗脱液氮吹，最后用异辛烷定容。

本发明的积极效果：利用气相色谱电子捕获检测器测定脐带血清中多氯联苯和有机氯农药含量的前处理方法，选用1-丙醇和超纯水混合液(V_1-丙醇∶V_超纯水＝15∶85)作为变性剂，使血清中蛋白变性的同时不会堵塞萃取柱，血清通过萃取柱时可以顺利通过；除使用C18萃取柱外，还使用碱性铝柱以便除掉血清中脂肪酸等其它物质的干扰，同时也解决了在每次配置浓硫酸和硅胶混合物时不一致化的问题。本发明公开的评估测定方法操作简单，样本需求量小，更适合流行病学调查需要。

【附图说明】

图1为前处理流程图。

【具体实施方式】

以下结合附图对本发明做详细说明。

耗材及试剂：

①所需试剂：