[发明专利]利用2-甲基乙酰乙酸乙酯促进微藻合成三酰甘油酯的方法

说明书

技术领域

本发明属于生物新能源开发技术领域，特别涉及一种利用2-甲基乙酰乙酸乙酯促进微藻合成三酰甘油酯的方法。

背景技术

近年来世界范围内的人口增长与工业发展，带来了资源与能源过度消耗、面临枯竭的困境；能源危机是21世纪人类面临的最大挑战。开发可持续再生、环境友好的新型能源，是应对该挑战的唯一途径。生物柴油是受到广泛关注的新型生物新能源。在以粮食谷物、油料作物或木质素作物为原料制备生物柴油方面已发展起来较为成熟的技术并具有市场应用。然而，以上述作物为原料大规模制备生物柴油将占用大量耕地或林地，与人类长期发展及生态环境建设不相符。微藻因光合作用效率高、生长速率快、收获周期短、单位藻细胞油脂含量高和占地面积小等优点，在生物柴油生产领域中受到了越来越多的关注。

发明内容

为了克服现有技术的缺陷，本发明的目的在于提供一种利用2-甲基乙酰乙酸乙酯促进微藻合成三酰甘油酯的方法，具有2-甲基乙酰乙酸乙酯投加浓度低、三酰甘油酯产量高、成本低廉、易于实现的特点。

为了达到上述目的，本发明的技术方案是这样实现的：利用2-甲 基乙酰乙酸乙酯促进微藻合成三酰甘油酯的方法，包括以下步骤：

一、人工配置培养基，培养基的成分为稀释50％的BG11，并控制培养基中总氮和总磷浓度分别为10～15mg·L^-1和1.0～1.5mg·L^-1；

二、向人工配制的培养基中接种栅藻，栅藻保藏号为CGMCC3036，接种密度为(3～10)×10⁵个mL^-1，接种完毕，再向培养基中投加0.5～1.0mg·L^-1的2-甲基乙酰乙酸乙酯EMA；

三、培养10天～18天，光暗比12h∶12h～14h∶10h、温度20～25℃、光照强度1000～1400lux，离心藻液收获藻细胞；通过有机溶剂萃取法提取藻细胞油脂及三酰甘油酯。

本发明的有益效果为：低浓度的2-甲基乙酰乙酸乙酯可促进高含油栅藻藻细胞油脂中的三酰甘油酯含量及单位藻液的三酰甘油酯产量，从而提高生物柴油原料的产量和微藻制备生物柴油的应用潜力。

附图说明

图1为实施例一投加2-甲基乙酰乙酸乙酯EMA和不投加2-甲基乙酰乙酸乙酯EMA时栅藻LX1藻细胞油脂中三酰甘油酯TAG含量及单位藻液三酰甘油酯TAG产量的对比。

图2为实施例二投加2-甲基乙酰乙酸乙酯EMA和不投加2-甲基乙酰乙酸乙酯EMA时栅藻LX1藻细胞油脂中三酰甘油酯TAG含量及单位藻液三酰甘油酯TAG产量的对比。

具体实施方式

下面结合实施例和附图对本发明做进一步说明。

实施例一

本实施例包括以下步骤：

一、人工配置培养基，培养基的成分为稀释50％的BG11，并控制培养基中总氮和总磷浓度分别为15mg·L^-1和1.5mg·L^-1；

二、向人工配制的培养基中接种栅藻，栅藻保藏号为CGMCC3036，接种密度为3×10⁵个mL^-1，接种完毕，再向培养基中投加0.5mg·L^-1的2-甲基乙酰乙酸乙酯EMA；

三、培养10天，光暗比14h∶10h、温度25℃、光照强度1000～1400lux，离心藻液收获藻细胞；通过有机溶剂萃取法提取藻细胞油脂及三酰甘油酯。

参照图1，不投加2-甲基乙酰乙酸乙酯EMA时，栅藻LX1藻细胞油脂中的三酰甘油酯TAG含量为11.5％，投加0.5mg·L^-12-甲基乙酰乙酸乙酯EMA时，栅藻LX1藻细胞油脂中的三酰甘油酯TAG含量为15.5％，投加和不投加相比提高了34.8％；投加0.5mg·L^-12-甲基乙酰乙酸乙酯EMA时，单位藻液三酰甘油酯TAG产量为19.2mg·L^-1，不投加2-甲基乙酰乙酸乙酯EMA时，单位藻液三酰甘油酯TAG产量为15.9mg·L^-1，投加和不投加相比提高了20.8％。

实施例二

本实施例包括以下步骤：

一、人工配置培养基，培养基的成分为稀释50％的BG11，并控制培养基中总氮和总磷浓度分别为15mg·L^-1和1.5mg·L^-1；