[发明专利]产气荚膜梭菌检测试剂盒及其使用方法

权利要求书

1.一种产气荚膜梭菌检测试剂盒，其特征在于，所述的产气荚膜梭菌检测试剂盒包括以产气荚膜梭菌的16S rDNA基因为靶基因、基于环介导恒温扩增技术设计的两对引物：内引物FIP/BIP和外引物F3/B3。

2.根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌检测试剂盒，其特征在于，所述的两对引物为

外引物F3(1)：

AACCTTCATCACTCACGCG

外引物B3(1)：

GCAATCCGCTATGAGATGGA

内引物FIP(1)：

TGATCGGCCACATTGGGACTGATTTTGGTTTCCCCCATTGTGCA

内引物BIP(1)：

CAGGTCGGCTACGCATCGTCTTTTCGGCGCATTAGCTAGTTGG

或

外引物F3(2)：

AACCTTCATCACTCACGCG

外引物B3(2)：

GCAATCCGCTATGAGATGGA

内引物FIP(2)：

TGATCGGCCACATTGGGACTGAGGTTTCCCCCATTGTGCA

内引物BIP(2)：

CAGGTCGGCTACGCATCGTCCGGCGCATTAGCTAGTTGG

或

外引物F3(3)：

GGGGTAACGGCCTACCAA

外引物B3(3)：

CCTCCTTGGGTACCGTCATT

内引物FIP(3)：

AGTCTGGGCCGTGTCTCAGTTTTTGATGCGTAGCCGACCTGA

内引物BIP(3)：

CAATGGGGGAAACCCTGATGCATTTTTCTTCCCCAAAGACAGAGCT

或

外引物F3(4)：

GGGGTAACGGCCTACCAA

外引物B3(4)：

CCTCCTTGGGTACCGTCATT

内引物FIP(4)：

AGTCTGGGCCGTGTCTCAGTGATGCGTAGCCGACCTGA

内引物BIP(4)：

CAATGGGGGAAACCCTGATGCATCTTCCCCAAAGACAGAGCT。

3.根据权利要求1所述的产气荚膜梭菌检测试剂盒，其特征在于，所述的产气荚膜梭菌检测试剂盒还包括BstDNA聚合酶、缓冲液、dNTPs、甜菜碱、硫酸镁、显色液、稳定液和阳性对照。

4.根据权利要求3所述的产气荚膜梭菌检测试剂盒，其特征在于，

所述的Bst DNA聚合酶：酶浓度7-10U/μL；

所述的缓冲液含：0.18-0.25mol/L Tris-HCl，0.10-0.15mol/L KCl，0.07-0.15mol/L(NH₄)₂SO₄，15-30mmol/L MgSO₄，1-2体积％TritonX-100；

所述的dNTPs：每种核苷酸浓度10-20mmol/L；

所述的甜菜碱：浓度3-6mol/L；

所述的硫酸镁：浓度100-200mmol/L；

所述的显色液为SYBR Green I或Eva Green；

所述稳定液为石蜡油；

所述的阳性对照为产气荚膜梭菌基因组DNA。

5.根据权利要求4所述的产气荚膜梭菌检测试剂盒，其特征在于，

所述的Bst DNA聚合酶：酶浓度8U/μL；

所述的缓冲液含：0.2mol/L Tris-HCl，0.1mol/L KCl，0.1mol/L(NH₄)₂SO₄，20mmol/L MgSO₄，1体积％TritonX-100；

所述的dNTPs：每种核苷酸浓度10mmol/L；

所述的甜菜碱：浓度5mol/L；

所述的硫酸镁：浓度150mmol/L。