[发明专利]重组人Rho激酶在制备药物中的应用

说明书

技术领域

本发明涉及重组人Rho激酶在制备药物中的应用。

技术背景

众所周知，心脑血管系统疾病成为人类最为常见的一类疾病，占全球死亡率第一位，成为威胁人类健康和生命的最重要的疾病。随着我国经济的发展、人口老龄化的加速、生活节奏的加快，人群中患高血压、高血脂、心力衰竭、脑卒中等心血管疾病明显增多，直接加重了家庭和社会负担。

小分子GTP结合蛋白是一种在细胞功能调节过程中起关键作用的单体G蛋白分子。Rho是一种小分子G蛋白，与GDP结合时处于失活状态，与GTP结合时转变为活性状态，在介导血管壁细胞间的信号传导中起重要作用。1985年，从海兔属(Aplysia)动物体内发现Rho基因是Ras基因的一个同源性基因。基于其结构和功能分析，Rho超家族可分为Rho、Rac和Cdc42三个亚家族。钙离子很早就被证明是细胞骨架的一个关键调节因子，越来越多的证据表明，Rho超家族是另一个肌动蛋白依赖的调节细胞功能的重要因子。

Rho激酶(Rho-associated coiled-coil forming protein kinase，ROCK)有2个亚型，即ROCK1和ROCK2，它们都是丝氨酸/苏氨酸激酶。2个亚型的蛋白质一级结构有65％的同源性，自N端依次含有激酶催化结构域、Rho结合结构域、PH(pleckstrin homology)结构域和半胱氨酸富集结构域，其中催化结构域的同源性高达92％。ROCK1与ROCK2广泛分布于机体的大部分器官中，ROCK2在大脑中含量丰富，而ROCK1在非神经系统的器官表达量较高，如心脏、肺、骨胳肌。在细胞中，ROCK2主要位于胞浆中，只有少量位于细胞膜上。研究表明，Rho/ROCK介导的信号传导通路，对细胞的分裂、收缩、粘附、迁移、分泌等活动具有重要调节作用，如平滑肌细胞收缩、细胞骨架重构、细胞迁移和增殖及神经元的形成和轴突的生长等。

迄今为止，我们没有查到重组人ROCK1功能片段蛋白在由各种因素包括疾病因素引起的血管功能降低相关的心脑血管疾病和/或症状的应用相关报道。

发明内容

本发明的一个实施方案提供了SEQ ID NO：1所示的重组人ROCK1功能片段蛋白(简称为RP1)在制备预防、缓解和/或治疗的心脑血管疾病和/或症状药物中的应用。所述的心脑血管疾病和/或症状可以是各种疾病因素引起的血管功能降低相关的。

本发明的一个实施方案提供了SEQ ID NO：1所示的重组人ROCK1功能片段蛋白在制备收缩血管药物中的应用。所述的血管收缩的作用与血管内皮相关、被钙通道阻断剂所阻滞、被Rho激酶抑制剂所抑制。所述的钙通道阻滞剂选自尼群地平、维拉帕米；所述的Rho激酶抑制剂选自法舒地尔。

本发明的一个实施方案提供了SEQ ID NO：1所示的重组人ROCK1功能片段蛋白在制备升高血压的药物中的应用。所述的血压为收缩压和舒张压

本发明的一个实施方案提供了SEQ ID NO：1所示的重组人ROCK1功能片段蛋白在制备加快心率的药物中的应用。

本发明的一个实施方案提供了SEQ ID NO：1所示的重组人ROCK1功能片段蛋白在制备预防、缓解或治疗休克的药物中的应用。

本发明的一个实施方案还提供了SEQ ID NO：1所示的重组人ROCK1功能片段蛋白在抑制剂筛选和评价中的应用。

在本发明中，所述预防、缓解和/或治疗由各种因素包括疾病因素引起的血管功能降低相关的心脑血管疾病和/或症状选自RP1具有Rho激酶活性可以使相应底物磷酸化；RP1具有收缩血管作用，这种血管功能调节作用与血管内皮相关、被钙通道阻断剂所阻滞、被Rho激酶抑制剂-法舒地尔所抑制；以静脉注射方式进入动物体内后可以升高动物血压并表现出起效快的特点；以注射方式给予较高剂量时具有加快动物心率的作用；具有提高由于各种因素包括疾病因素降低的血管功能的作用。

本发明还提供了测定RP1活性的方法，RP1具有丝氨酸/苏氨酸激酶特性，使S6(AKRRRLSSLRA)等多肽底物磷酸化而消耗ATP，通过测定ATP含量可检测RP1的激酶活性。因此本发明的RP1在可以在抑制剂筛选和评价中的应用，例如通过RP1酶活性评价进行药物筛选，评价化合物或其他物质对酶活性的影响。