[发明专利]黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物及其制备方法无效
申请号: | 201010117931.1 | 申请日: | 2010-03-04 |
公开(公告)号: | CN101928704A | 公开(公告)日: | 2010-12-29 |
发明(设计)人: | 刘国安;沈立民;刘翔;胡芬芬;张弨;张加慧;刘沐荣 | 申请(专利权)人: | 杭州北斗生物技术有限公司 |
主分类号: | C12N11/08 | 分类号: | C12N11/08;A61P19/06;C12R1/67 |
代理公司: | 杭州金源通汇专利事务所(普通合伙) 33236 | 代理人: | 呼保平 |
地址: | 310015 浙江*** | 国省代码: | 浙江;33 |
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摘要: | |||
搜索关键词: | 黄曲霉 尿酸 氧化酶 聚乙二醇 修饰 及其 制备 方法 | ||
1.一种黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,聚乙二醇和黄曲霉尿酸氧化酶以共价键连接,每个黄曲霉尿酸氧化酶分子亚基平均结合2~10个聚乙二醇分子,其特征在于:聚乙二醇分子的平均分子量为4kd-9kd,黄曲霉尿酸氧化酶聚乙二醇修饰物的酶比活性为5.0-10.0U/mg。
2.如权利要求1所述的黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,其特征在于:与未结合聚乙二醇的黄曲霉尿酸氧化酶相比,黄曲霉尿酸氧化酶聚乙二醇修饰物动物注射后产生抗体的滴度为1∶320~1∶1280。
3.如权利要求1所述的黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,其特征在于:与未结合PEG的黄曲霉尿酸氧化酶相比,黄曲霉尿酸氧化酶聚乙二醇修饰物的在动物体内的半衰期为62小时。
4.如权利要求1-3任一项权利要求所述的黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,其特征在于:黄曲霉尿酸氧化酶是通过基因工程技术采用大肠杆菌表达系统获得的重组尿酸氧化酶。
5.如权利要求1-3任一项权利要求所述的黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,其特征在于:聚乙二醇的平均分子量为5kd-8kd。
6.如权利要求5所述的黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,其特征在于:聚乙二醇的平均分子量为5kd。
7.如权利要求1-3任一项权利要求所述的黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,其特征在于:黄曲霉尿酸氧化酶聚乙二醇修饰物的酶比活性为6.0-10.0U/mg。
8.如权利要求7所述的黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,其特征在于:黄曲霉尿酸氧化酶聚乙二醇修饰物的酶比活性为8.0-10.0U/mg。
9.如权利要求1所述的黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,其特征在于:聚乙二醇分子通过胺酯共价键偶联到黄曲霉尿酸氧化酶分子上。
10.如权利要求1所述的黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物,其特征在于:聚乙二醇分子是分枝的。
11.一种黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物的制备方法,其特征在于:纯度大于95%的重组黄曲霉尿酸氧化酶蛋白,采用平均分子量为4kd-9kd的活化聚乙二醇分子在pH值5~10、温度4~37℃、时间0.1~10小时进行修饰,聚乙二醇分子和黄曲霉尿酸氧化酶的质量比为3∶1~20∶1。
12.如权利要求11所述的一种黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物的制备方法,其特征在于:聚乙二醇分子通过胺酯键共价偶联到尿酸氧化酶分子上。
13.如权利要求11所述的一种黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物的制备方法,其特征在于:活化聚乙二醇为聚乙二醇硝基苯酯或聚乙二醇琥珀酰亚胺酯。
14.如权利要求13所述的一种黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物的制备方法,其特征在于:聚乙二醇琥珀酰亚胺酯为聚乙二醇丙酸酯、聚乙二醇乙酸酯和聚乙二醇碳酸酯中的任意一种。
15.如权利要求11所述的一种黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物的制备方法,其特征在于:修饰反应的pH值为8~9.2。
16.如权利要求11所述的一种黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物的制备方法,其特征在于:修饰反应的温度为10~15℃。
17.如权利要求11所述的一种黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物的制备方法,其特征在于:修饰反应时间为0.5~2小时。
18.如权利要求11所述的一种黄曲霉尿酸氧化酶的聚乙二醇修饰物的制备方法,其特征在于:聚乙二醇分子和黄曲霉尿酸氧化酶的质量比为5∶1~15∶1。
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