[发明专利]一种痰液的检测、分析方法及其用途

说明书

技术领域

本发明属生物医学领域，涉及一种痰液的检测、分析方法，具体涉及一种检测分析痰液中细胞、细胞因子以及炎症介质变化的方法。本方法有助于呼吸系统疾病支气管哮喘的分型和中医证型的微观辨证。

背景技术

临床医学研究显示，支气管哮喘是由多种炎症细胞、细胞因子和炎性介质等所促成的慢性气道炎症性疾病，属于中医学哮病的范畴。中医学认为“伏痰”是哮病的宿根。其基本病理变化为伏痰遇感引触，痰随气升，气因痰阻，相互搏结，壅塞气道，而致痰鸣如吼，气息喘促。与现代医学认为慢性气道炎症是哮喘的重要病理基础一样，中医的痰在哮病的发病当中也占据着枢纽的位置。对于哮病发作期，中医学认为素体阳虚，外感于寒，则发为冷哮；素体阳盛，外感于热，则发为热哮，主要以“寒痰、热痰”等证型进行辨证治疗。一般认为，中医“热痰证”与呼吸道细菌等病原体感染有着密切的关系。有研究发现热哮血中性粒细胞往往明显升高，寒哮嗜酸性粒细胞明显升高，其反映了血中炎症细胞的结果，但未见其对哮喘寒痰证和热痰证气道局部的炎症指标进行分析。鉴于中医“有形之痰”在哮病中的重要性，有关研究领域已在关注哮喘寒痰证和热痰证患者痰和血中炎症细胞的变化的关系。目前国内外尚无相关报道。

发明内容

本发明的目的在于提供一种痰液的检测、分析方法及其用途，具体涉及一种检测分析痰液中细胞、细胞因子以及炎症介质变化的方法。本发明针对中医哮喘寒痰证和热痰证患者痰和血中炎症细胞的变化的关系，提供一种利用诱导痰技术对痰液进行检测、分析的方法。本方法有助于呼吸系统疾病支气管哮喘的分型和中医证型的微观辨证。

具体而言，本方法采用诱导痰技术分析哮喘寒痰证和热痰证患者痰和血中炎症细胞的变化，并结合相关的炎症因子及炎性介质的变化，提供用于支气管哮喘中医“寒痰、热痰”微观辨证的参考指标，并评价其可靠性。

具体而言，本方法采用诱导痰技术使哮喘寒痰证、热痰证患者咳出深部痰液，对痰液进行细胞学分类计数以及检测痰上清液和血清中IL-8、IL-5、ECP、IL-4、IL-6、IL-10、IFN-γ、LTB4、CRP等相关炎症指标，提供用于支气管哮喘中医“寒痰、热痰”微观辨证的参考指标，并评价其可靠性。

本方法采用诱导痰技术使患者咳出深部痰液，分析痰液中炎性细胞、相关细胞因子的方法，并与血液中的相关指标进行比较，包括下述步骤：

1)诱导痰技术：

根据Pin等的改良方法，制定下述流程：

①测基础第一秒用力呼气量(FEV₁)；②吸入沙丁胺醇；③10min后再测FEV₁作为基础值；④室温下超声雾化器吸入消毒的高渗盐水；⑤间隔测FEV₁和连续监测脉搏血氧饱和度；⑥测得FEV₁降低值大于20％基础值时，暂停雾化吸入试验；⑦收集雾化吸入后第5、10、15、20min咳出深部的。

2)细胞学检测：镜下挑选上述痰液黏稠部分，称重后加入0.1％二硫苏糖醇(DTT)，置于37℃水浴箱，螺旋振荡至均匀，离心，制作细胞涂片，染色，光镜下计数400个以上非立方上皮细胞，分类计数，留取上清液，-70℃冰箱冻存。

3)根据哮喘发作期的中医辨证分类证型，收集符合寒痰证、热痰证的哮喘患者痰涂片染色，显微镜下进行细胞分类计数，检测痰液和血液嗜酸性粒细胞、中性粒细胞百分比；血常规测定嗜酸性粒细胞和中性粒细胞百分比；用酶联免疫吸附实验(ELISA)方法检测痰上清液和血清白介素-8(IL-8)、IL-5、嗜酸性阳离子蛋白(ECP)、IL-4、IL-6、IL-10、干扰素-γ(IFN-γ)、白三烯B4(LTB4)、C反应蛋白(CRP)。

4)分析比较痰液中炎性细胞、相关细胞因子与血液中的相关指标，获得用于支气管哮喘中医“寒痰、热痰”微观辨证的参考指标。

所述的参考指标包括痰上清液和血清中相关炎症指标：嗜酸性粒细胞、嗜酸性阳离子蛋白、中性粒细胞、诱导痰EOS和嗜酸性阳离子蛋白、白三烯B4、TH2和/或C反应蛋白。

所述的参考指标可用作制定评价支气管哮喘中医“寒痰、热痰证”微观辨证指标。