[发明专利]一种用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法

权利要求书

1.一种用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，该方法包括以下步骤：

1)制备凝集素芯片；

2)制备生物样本；

3)将生物样本加载到凝集素芯片上以获得甲型流感病毒亚型及其毒力的结果。

2.根据权利要求1所述的用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，其特征在于：

所述步骤1中制备凝集素芯片包括以下步骤：

1)取环氧化片基备用；

2)将凝集素配制成浓度为1mg/ml的点样液；

3)将配制的点样液加到384孔板内；再用芯片点样仪在环氧化片基上点样；

4)将点制好的芯片在湿度为55％-65％的环境中孵育2.5-3.5小时；

5)对孵育好的芯片在37℃的环境中抽真空3小时，使芯片干燥，并使凝集素固定于芯片上；

6)将固定好的凝集素芯片放置在干燥器中以备用。

3.根据权利要求1所述的用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，其特征在于：所述步骤2中制备生物样本包括以下步骤：

1)准备所需样本；

2)用分析纯乙醚对样本病毒充分裂解；

3)对裂解后的病毒进行浓缩至含病毒蛋白至少0.1mg/mL，形成浓缩样本；

4)用荧光试剂对浓缩样本进行标记，去除未反应的荧光试剂；

5)将标记好的样本分装冻存于-20℃以下的环境中。

4.根据权利要求1所述的用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，其特征在于：所述步骤3包括以下步骤：

1)将质量分数为1-2％牛血清白蛋白溶解到磷酸盐缓冲液-吐温20中配制成封闭液，将制备好的凝集素芯片置于封闭液中1小时；

2)将封闭后的凝集素芯片用磷酸盐缓冲液-吐温20和磷酸盐缓冲液分别清洗各2次，每次3分钟，再经甩干后备用；

3)对甩干后的凝集素芯片加入3-5μg标记好的样本和750-850μL的孵育缓冲液，并在室温孵育3小时；

4)将孵育后的凝集素芯片用磷酸盐缓冲液-吐温20和磷酸盐缓冲液分别清洗各2次，每次3分钟，再甩干；

5)对甩干后的凝集素芯片用芯片扫描仪扫描，得到凝集素与标记后糖蛋白结合的荧光图像；

6)通过芯片分析软件对荧光图像进行中值读取，对图像中的凝集素所对应的糖链结构分析后得出甲型流感病毒亚型及其毒力的结果。

5.根据权利要求3所述的用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，其特征在于：所述步骤1中的样本为高致病性样本或低致病性样本。

6.根据权利要求5所述的用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，其特征在于：所述高致病性样本包括H5N1(DK/GD/17/08)、H5N1(CK/GX/4/09)、H5N2(Mallard/JX/16/05)、H7N1(KP)。

7.根据权利要求5所述的用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，其特征在于：

所述低致病性样本包括H5N2(Ostrich/Denmark/96-72420/96)、N7N2(HB7)、H9N2(CK/FJ/S-1-521/08)、H9N2(DK/GD/S-7-134/04)。

8.根据权利要求2所述的用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，其特征在于：

所述步骤4)中将点制好的芯片在湿度为60％的环境中孵育3小时。

9.根据权利要求4所述的用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，其特征在于：

所述步骤3)中对甩干后的凝集素芯片加入4μg标记好的样本和780μL的孵育缓冲液，并在室温孵育3小时。

10.根据权利要求4所述的用凝集素芯片同时分析甲型流感病毒亚型及其毒力的方法，其特征在于：所述步骤6)中的凝集素为2种以上。