[发明专利]倍半萜混对苯二酚类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域：

本发明涉及用链格孢菌SP-32(Alternaria sp.)(保藏编号是：CCTCC M2010044)生产倍半萜混苯二酚类化合物的方法；本发明还涉及该类化合物在制备抗甲型H1N1流感药物中的用途。 

背景技术：

倍半萜混苯酚类化合物是多产生于海绵、海鞘等无脊椎动物的一种活性混源萜类化合物，但链格孢菌作为其来源未见报道。本发明人研究得知，链格孢菌SP-32(Alternaria sp.)(保藏编号：CCTCC M 2010044，保藏日期：2010年2月5日，保藏单位：中国典型培养物保藏中心，地址：武汉市武汉大学)液体发酵产物经超声破碎后的粗提物有很好的抗甲型H1N1流感病毒增殖作用，遂对其活性成分进行了研究。研究发现所示倍半萜混苯二酚类化合物具有较强的抗甲型H1N1流感病毒活性，目前尚未见该化合物的化学结构及抗甲型H1N1流感病毒的报道，因此市场上也尚未见有与此有关的药物。 

发明内容：

本发明旨在提供一个结构独特的具有抗甲型H1N1流感病毒作用的新化合物。其结构式为： 

式I化合物 

其结构特征是：此结构是新颖的倍半萜混苯酚类化合物，其中R₁-R₅为氢、氨基、羟基、烷氧基、酰氧基或酰氨基。 

本发明优选的结构中R₁-R₄为羟基、R₅为甲氧基。 

本发明所涉及的化合物可通过微生物发酵培养来获取含有倍半萜混苯酚类化合物的发酵物，然后从发酵物中采用硅胶柱层析、Sephadex LH20凝胶柱层析 制备HPLC等方法分离纯化得到。 

本发明的下述实施例中列举了利用链格孢菌SP-32(Alternaria sp.)(保藏编号是：CCTCC M 2010044)制备本发明所示化合物的实例。 

具体实施方式：

在如下的实施例中所指的化合物的化学结构(结构式中的阿拉伯数字是化学结构中碳原子的标位)为： 

实施例1  化合物的发酵生产及分离精制 

1发酵生产 

生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取链格孢菌SP-32(Alternariasp.)(保藏编号是：CCTCC M 2010044)适量，接种到PDA固体斜面培养基上，在28摄氏度培养箱中培养4天。 

取斜面培养4天的链格孢菌SP-32(Alternaria sp.)适量，接种到装有200mL培养液[培养基组成(克/升)：麦芽糖20.0，甘露醇20.0，味精10.0，KH₂PO₄ 0.5，MgSO₄ 0.3，酵母膏3.0，pH自然]的500mL锥型瓶中，在28℃、160转/分钟条件下摇床培养8天，获得菌丝体和发酵液。 

2浸膏的获得 

用棉布将菌丝体和发酵液分离。将发酵液等体积乙酸乙酯萃取三次，将乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得粗浸膏。 

3化合物的分离精制 

浸膏用氯仿-甲醇混合溶剂溶解后，加200-300目硅胶(青岛海洋化工集团公司产品)拌样，减压除去溶剂后，用硅胶柱层析，以石油醚、石油醚-丙酮，氯仿，氯仿-甲醇为溶剂进行梯度洗脱，分为5个流份。将Fr-4(氯仿-甲醇97∶3洗脱物)以氯仿-甲醇(1∶1)为溶剂进行LH20柱层析，再经加压硅胶柱层析以石油醚∶丙酮(9∶1→5∶5)为溶剂，最后经半制备反相高效液相色谱(甲醇∶水＝65∶35)得所示化合物。 

化合物I无色油状，正离子ESI-MS m/z 415.2[M+Na]⁺， 4.4(c 0.1，MeOH)，分子式C₂₂H₃₄O₅，IR(KBr)cm-1：1693，1620，1509，1441，1308，1222， 1017，990。¹H和¹³C-NMR数据见表1。 

表1化合物I的¹H和¹³C NMR数据(600和150MHz，in DMSO-d₆)^a

a)本表信号归属基于DEPT、HMQC及HMBC图谱解析结果。碳信号的多重度利用DEPT方法确定并分别用s(单重峰)、d(二重峰)、t(三重峰)和q(四重峰)表示。