[发明专利]一种含多硫键的哌嗪类化合物及其制备方法和用途

说明书

技术领域：

本发明涉及用Oidiodendron truncatum GW3-13(保藏编号是：CCTCC M 2010043)生 产含多硫键的哌嗪类化合物(ETPs)的方法；本发明还涉及该类化合物在制备细胞增殖抑 制剂或缺氧诱导因子(HIF-1)靶向抗肿瘤剂中的用途。

背景技术：

本发明人曾经从Oidiodendron truncatum GW3-13(保藏编号是：CCTCC M 2010043) 液体发酵产物中发现具有明显抗肿瘤活性的含多硫键的哌嗪类化合物。研究发现所示含多 硫键的哌嗪类化合物具有细胞增殖抑制活性、细胞毒活性及缺氧诱导因子(HIF-1)抑制活 性，但是市场上尚未见有与此有关的药物。

发明内容：

本发明旨在提供一种结构独特的具有抑制肿瘤细胞增殖作用，具有抗肿瘤活性的化合 物。其结构式

式I

其结构特征是：含多硫键的二酮哌嗪二聚体，其中x＝2或3。

本发明优选的式I化合物其中x＝3。

本发明的式I化合物可通过微生物发酵培养来获取含有含多硫键的哌嗪类化合物的发 酵物，然后从发酵物中采用硅胶柱层析、制备HPLC等方法分离纯化得到。

本发明的下述实施例中列举了利用Oidiodendron truncatum GW3-13(保藏编号是： CCTCC M 2010043)制备本发明式I化合物的实例。

具体实施方式：

在如下的实施例中所指的化合物I的化学结构：

化合物I

实施例1化合物I的发酵生产及分离精制

1发酵生产

生产菌的发酵培养：按培养微生物的常规方法，取Oidiodendron truncatum GW3-13(保 藏编号是：CCTCC M 2010043)适量，接种到PDA固体斜面培养基上，在15摄氏度培养箱 中培养10天。

用接种针刮取适量孢子接种到接入装有300ml培养基[山梨醇2％、麦芽糖2％、味精 1％、KH₂PO₄ 0.05％、MgSO₄ 0.03％、色氨酸0.05％、酵母浸膏0.1％、黄豆粉0.05％、味精 0.2％]的1000ml发酵三角瓶中，20℃左右静置培养约30天，获得菌丝体和发酵液。

2浸膏的获得

用棉布将菌丝体和发酵液分离。将菌丝体用丙酮浸提三次，减压浓缩至不含丙酮，所 得水层用等体积乙酸乙酯萃取三次，合并乙酸乙酯萃取液减压浓缩，得粗浸膏。发酵液减 压浓缩为四分之一体积后，用乙酸乙酯萃取三次，合并菌丝体和发酵液的浸膏，共35.0克。

3化合物的分离精制

浸膏(35.0克)用氯仿-甲醇混合溶剂溶解后，加300克200-300目硅胶(青岛海洋化 工集团公司产品)拌样，减压除去溶剂后，用硅胶柱层析，以石油醚、石油醚-氯仿，氯仿- 甲醇为溶剂进行梯度洗脱，分为7个组份。Fr-4(氯仿-甲醇19∶1洗脱物)，再经加压硅胶柱 层析以氯仿∶甲醇(50∶1)为溶剂进行洗脱，半制备反相高效液相色谱分离得化合物I (300mg)。

化合物I  白色无定形粉末，分子式C₃₀H₂₈N₆O₈S₅。

¹H和¹³C-NMR数据见表1。

表1化合物I的¹H和¹³C NMR数据(400和100MHz，in CDCl₃)^a

a)本表信号归属基于DEPT、HMQC及HMBC图谱解析结果。碳信号的多重度

利用DEPT方法确定并分别用s(单重峰)、d(二重峰)、t(三重峰)和q(四重峰)表示。

b)此栏中的数字和代号分别代表在HMBC谱中与相应行中的¹H给出偶合相关信号的¹³C 核。

实施例2体外抗肿瘤活性的测试

细胞增殖抑制活性测试

1实验样品及实验方法